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目的:通过体外培养牙龈成纤维细胞(Human gingival fibroblast,HGF),用牙龈卟啉单胞菌(PorPhyromonas Gingivalis,Pg)脂多糖(LPoPolysaccharide,LPS)刺激牙龈成纤维细胞建立牙周炎细胞模型,采用不同能量密度低水平激光(Low Lever Light Therapy,LLLT)照射牙周炎细胞模型,通过检测细胞增殖情况及骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达量的变化,研究LLLT对细胞外基质蛋白表达的影响、寻找低水平激光发挥作用的最佳参数及其发挥作用的机制。方法:1.组织块法提取原代牙龈成纤维细胞,免疫组织化学法鉴定细胞来源。2.Real-time PCR法检测Pg.LPS刺激HGF后24h内IL-6的mRNA表达的情况,以及2h、4h、6h、12h、24h时间点骨膜蛋白和Ⅰ型胶原的表达情况。3.能量密度为2J/cm~2、4J/cm~2、8J/cm~2的650nm低能量激光照射牙周炎细胞模型,MTT法检测细胞增殖情况。4.Real-time PCR和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别用于检测LLLT作用下细胞内骨膜蛋白和Ⅰ型胶原基因和蛋白水平的变化,确定激光作用的最佳参数,在最佳参数设定下,加入通路抑制剂SIS3,ELISA法检测两种蛋白表达变化。结果:1.组织块法可成功提取牙龈成纤维细胞,显微镜下细胞形态为星形或长梭形。免疫组化法检测细胞组分显示:细胞抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性。2.Real-time PCR检测结果示:Pg.LPS刺激后IL-6表达显著增加,HGF处于炎症状态。在2h、4h、6h、12h骨膜蛋白表达量低于对照组(p<0.05),其中12h表达量最低(p<0.05)。在6h、12h Ⅰ型胶原的表达均较低(p<0.001);12h后两种蛋白的表达随时间增加。3.MTT实验结果表明:与牙周炎组相比,能量密度为2J/cm~2、4J/cm~2、8J/cm~2时牙龈成纤维细胞的增殖率均明显增加(p<0.05),能量密度为4J/cm~2时增殖率最高(p<0.001)4.Real-time PCR结果表明:LLLT照射后骨膜蛋白和Ⅰ型胶原的表达明显高于牙周炎组(p<0.05),能量密度为4J/cm~2时,HGF表达骨膜蛋白和Ⅰ型胶原最高(p<0.01);ELISA结果显示:与牙周炎组相比,LLLT照射后,Ⅰ型胶原含量增加(p<0.05)。当能量密度设定为4 J/cm~2时,骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达量最高(p<0.01)。加入通路抑制剂SIS3后,骨膜蛋白和Ⅰ型胶原表达均下降(p<0.05)。结论:1.组织块法可成功培养原代牙龈成纤维细胞,细胞增殖较快,对干预反应好,能满足实验需求。2.2ug/ml Pg.LPS能促进牙龈成纤维细胞大量分泌炎症因子,成功建立牙周炎细胞模型。牙周炎细胞模型中,骨膜蛋白和Ⅰ型胶原的表达整体上呈先下降后上升的趋势。说明炎症刺激后早期炎症破坏占优势,随时间延长组织修复愈合占优势。3.与单纯牙周炎细胞组相比,在一定的激光参数范围内(2-8J/cm~2),LLLT能促进牙周炎细胞模型增殖,在激光参数设定为650nm、4J/cm~2时,能最大程度促进细胞增殖。4.在基因水平,能量密度范围在2-8J/cm~2,650nm的低能量激光刺激骨膜蛋白和Ⅰ型胶原分泌。在激光参数设定为650nm、4J/cm~2时,无论在基因水平和蛋白水平均能最大程度促进骨膜蛋白和Ⅰ型胶原分泌,且低水平激光可以通过TGF-β/smad3信号通路促进两种蛋白分泌。