赖氨酸是大多数谷物中的第一限制氨基酸，因此长期以谷物主食将会导致赖氨酸缺乏，造成恶心、头晕、食欲不振、生长缓慢、代谢障碍等。因此，寻找高赖氨酸含量外源蛋白，补充赖氨酸摄入量的不足，十分重要。本研究通过筛选奶蛋白中编码高赖氨酸含量的基因片段，拼接赖氨酸基因，并构建赖氨酸基因乳腺特异表达载体。通过体外培养细胞、乳腺导管注射的体内实验及转基因小鼠来验证基因及载体的有效性、赖氨酸蛋白的表达、性质及功能。最后，利用赖氨酸基因乳腺特异表达载体转染奶牛胎儿成纤维细胞，获得稳定整合赖氨酸基因的转基因细胞系，并以其为供核细胞，利用核移植技术最终获得转赖氨酸基因克隆奶牛4头。主要结果包括：（1）选取奶蛋白β-酪蛋白、α-s2酪蛋白及乳转铁蛋白中编码高赖氨酸含量的cDNA片段，按3’α-s2酪蛋白、乳转铁蛋白、β-酪蛋白5’顺序设计合成赖氨酸基因（LR）。构建真核表达载体pcDNA3.1-LR-his并转染293T细胞，利用抗his单克隆抗体检测到融合蛋白特异性表达。（2）成功扩增出以磷酸甘油酸酯激酶启动子（PGK）驱动的真核细胞筛选标记NEO基因编码序列，构建赖氨酸基因乳腺特异性表达载体pBC1-NEO-LR。通过该载体瞬时转染泌乳期奶牛乳腺成功瞬时表达赖氨酸蛋白，使转染奶样中赖氨酸含量由转染前的1.66mg/mL提高到转染后的3.64mg/mL。（3）将线性化赖氨酸基因乳腺特异表达载体PBC1-NEO-LR注射小鼠受精卵雄原核，获得3只F0代阳性转基因小鼠，目前已传至第五代。研究结果表明，赖氨酸基因能够整合到小鼠基因组中并稳定遗传，赖氨酸蛋白能够在转基因鼠奶中高效表达，并使转基因奶中赖氨酸含量显著提高，同时，赖氨酸鼠奶对哺乳期小鼠生长具有促进作用。（4）乳腺特异表达载体pBC1-LR-NEO转染奶牛胎儿成纤维细胞，获得来源于3个奶牛胎儿的稳定整合赖氨酸基因的转基因细胞系，并以此细胞为核供体利用核移植技术，最终获得转基因克隆牛4头。