酸提菜籽饼粕多糖的研究

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菜籽饼粕是油菜籽榨油加工后的副产品,替代部分饲用蛋白或作为肥料使用,没有食用、药用价值。本文详细、系统地研究了菜籽饼粕中的有用成分—酸提菜籽多糖,通过多种提取和分离技术,分别获得了分子量大于100KDa级分(RAPT)、亚级分(RAPT-Ⅱ)和介于100KDa与50Kda组分(RAPF)。采用多种化学分析及现代仪器分析技术,初步确定了组分RAPT-Ⅱ的化学结构,并对其进行了体内、体外生物活性的初步评价。1、采用5因子二次正交旋转设计,研究了酸浓度、料液比、提取时间、提取温度、提取次数等5因素对从菜籽饼粕中用酸提取多糖得率的影响,用SAS8.0中响应面分析程序RSREG建立并分析了5因素对得率的函数模型。结果表明,所得回归方程达显著水平,拟合情况良好;5因素对得率的影响大小依次为提取温度>提取次数>提取时间>酸浓度>料液比,最佳提取温度为100℃,提取次数4~5次,提取时间(每次)1.4~1.8小时,酸浓度0.10~0.14mol/L,料液比1:18~1:22,菜籽饼粕酸提多糖得率在3.1%以上。2、酸提菜籽多糖粗品经AB8大孔树脂处理,得到初步纯化的菜籽多糖RAP,蛋白脱除率达87.9%。RAP经超滤分级得到2个级分,分子量大于100KDa的RAPT和分子量大于50KDa的RAPF,RAPT和RAPF组分得率分别为42.14%和45.59%;RAPT再经DEAE-Sephadex A-25柱分离,获得相应主要亚级分RAPT-Ⅱ得率约为67.4%。RAPT-Ⅱ经Sephadex G-200柱和滤纸电泳鉴定,为相对均一多糖。RAPF,RAPT,RAPT-Ⅱ均为白色絮状的非淀粉多糖;中性糖含量分别为45.6%,42.5%和71.4%;糖醛酸含量分别为31.3%,25.7%和20.3%;蛋白质含量分别为11.2%,17.5%和4.4%。GPS法测定RAPT-Ⅱ的重均分子量为8.59×105Dal。通过紫外光谱、红外光谱扫描、高效液相色谱、氨基酸分析、β-消除反应、高碘酸氧化反应以及刚果红试验分析RAPT-Ⅱ的结构,初步认为:菜籽多糖RAPT-Ⅱ主要由果糖、甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖及己糖醛酸组成,糖链主要由β-糖苷键连接,含有蛋白质。3、研究酸提菜籽多糖各级分的抗氧化作用。用K3[Fe(CN)6]与H2O2/Fe2+体系评价酸提菜籽多糖的还原能力及清除羟基自由基(.OH)的能力;用比色法分析酸提菜籽多糖对小鼠红细胞氧化溶血的影响;用丙二醛(MDA)试剂盒测定MDA的生成量,用比色法测定小鼠肝线粒体肿胀度。结果显示,在化学模拟体系中,酸提菜籽多糖具有还原能力及清除羟基自由基(.OH)的能力。在体外,酸提菜籽多糖具有抑制小鼠红细胞溶血,抑制小鼠肝组织匀浆及肝线粒体MDA的生成和肝线粒体肿胀的作用,剂量-效应关系明显。在体内,灌胃酸提菜籽多糖组小鼠(200mg·kg-1·d-1,10d)与对照组相比,肝匀浆MDA的降低均达到极显著水平,血清SOD活力和GSH-PX活力平均值的升高均达到极显著水平(P<0.01)。以上结果表明,酸提菜籽多糖在体内外均具有明显的抗氧化作用,酸提菜籽多糖具有还原能力且能影响与氧化有关的酶的活性可能是其抗氧化的机理。
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