背景:爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一种普遍存在的γ疱疹病毒,是最常见的人类疱疹病毒之一,可感染世界90%以上的成年人,并在原发感染后建立终身潜伏感染。EBV是传染性单核细胞增多症的病原体,也是最早确认的与人类肿瘤密切相关的病毒。研究表明,EBV与多种人类恶性肿瘤密切相关,如霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌、胃癌、结外NK/T细胞淋巴瘤以及免疫功能低下患者的淋巴增生性疾病。在感染细胞中,EBV多以称为附加体的质粒形式存在于宿主细胞内,不与宿主细胞基因组整合。肿瘤细胞通常表现出细胞糖基化的变化,这是常见的肿瘤标志物。O-聚糖合酶葡糖胺基(N-乙酰基)转移酶3(Glucosaminyl(N-Acetyl)Transferase 3,GCNT3)是一种粘蛋白型转移酶,负责催化核心2和核心4 O-聚糖,并促进O-联糖基化蛋白质生物合成。目前尚未见有关EBV感染与GCNT3蛋白表达关系的研究报道。目的:探讨GCNT3在EBV相关胃癌(EBV-associated gastric cancer,EBVaGC)发生发展的具体作用,明确EBVaGC发生发展中EBV对GCNT3表达的影响以及可能的作用机制,为EBVa GC病因学研究提供实验基础和新的思路。材料和方法:(1)Western blot检测EBV阳性胃癌细胞系(GT38,GT39,SNU719)和EBV阴性胃癌细胞系(BGC823,HGC27,SGC7901,AGS)中GCNT3蛋白和mTOR通路相关分子的表达,以及采用不同试剂处理后相关蛋白分子的表达;免疫组化检测胃癌组织中GCNT3蛋白表达。(2)CCK8、Transwell和流式细胞分析检测TGF-β1、mTOR通路、GCNT3和miR-BART1-5p对细胞表型的影响。(3)双荧光素酶实验检测miR-BART1-5p是否靶向GCNT3编码基因。(4)采用免疫荧光技术检测GCNT3蛋白的亚细胞定位。(5)实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR)检测EBV阳性胃癌细胞系miR-BART1-5p、LMP2A及GCNT3的转录表达。(6)采用TGF-β1、mTOR通路激活剂和抑制剂以及靶向GCNT3编码基因的siGCNT3处理胃癌细胞,检测GCNT3蛋白及EMT相关蛋白表达的变化。(7)采用LMP2A重组质粒转染EBV阴性胃癌细胞系SGC7901,筛选稳定表达LMP2A的细胞克隆SGC7901-LMP2A;并采用靶向LMP2A编码基因的si LMP2A转染EBV阳性胃癌细胞系GT38,检测外源性LMP2A表达和LMP2A沉默对GCNT3蛋白及mTOR通路相关蛋白表达的影响。结果:(1)EBV阳性胃癌细胞系中GCNT3蛋白的表达水平明显低于EBV阴性胃癌细胞系(P<0.05);EBV阳性胃癌细胞系中mTOR通路呈抑制状态;EBV阴性胃癌组织中GCNT3表达水平较高,其高表达与淋巴结转移呈正相关。(2)mTORC1-GCNT3激活可促进细胞增殖和迁移,并抑制G0/G1细胞周期停滞,但对细胞凋亡没有显著影响。(3)miR-BART1-5p可直接靶向GCNT3编码基因,通过下调GCNT3蛋白表达抑制细胞增殖与迁移。(4)NF-κB信号可激活miR-BART1-5p转录表达,进而抑制GCNT3蛋白表达。(5)免疫荧光结果显示EBV阳性胃癌细胞系中GCNT3蛋白的表达水平明显低于EBV阴性胃癌细胞系,阳性信号主要定位于细胞核。(6)EBV潜伏膜蛋白LMP2A可抑制GCNT3蛋白及mTOR通路相关蛋白分子的表达,LMP2A可通过mTORC1信号通路下调GCNT3蛋白的表达。(7)TGF-β1可激活mTORC1-GCNT3通路,进而促进EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系的细胞迁移;而TGF-β1可促进EBV阴性胃癌细胞的凋亡和G0/G1细胞停滞,LMP2A可抑制TGF-β1对EBV阳性胃癌细胞凋亡的调控。结论:(1)EBV在阳性胃癌细胞系和EBVa GC组织中均下调GCNT3的表达,EBV编码的mi R-BART1-5p通过靶向GCNT3抑制细胞增殖和迁移。(2)NF-κB信号通路的激活可促进EBV阳性胃癌细胞miR-BART1-5p的转录表达,进而下调GCNT3蛋白的表达;E-cadherin,N-cadherin,波形蛋白和p-ERK可能是miR-BART1-5p/GCNT3途径的下游分子。(3)LMP2A可抑制mTORC1通路的激活,并可通过下调TGF-β1-mTORC1信号传导的作用抑制GCNT3蛋白表达。(4)激活mTORC1-GCNT3途径可促进细胞增殖和迁移并抑制G0/G1期细胞停滞。激活TGF-β1-mTORC1-GCNT3途径可通过调控下游EMT途径中相关基因的表达促进细胞迁移。