论文部分内容阅读
[目的]
本研究拟以早产SD大鼠为研究对象,观察早产新生鼠在高氧条件下不同时间点肺的形态学变化,同时检测肺组织血管内皮生长因子及内皮抑素表达的动态变化,旨在探讨在高氧过程中,内皮抑素可能发挥的作用及内皮抑素与肺泡发育、肺损伤的关系,为下一步血管内皮生长因子、内皮抑素与早产儿肺疾病关系的临床研究提供理论基础和依据。
[方法]
1.早产鼠高氧肺损伤模型的制备:将SD大鼠雌雄按3:1傍晚合笼交配,次日晨取雌鼠阴道分泌物涂片,镜检见精子,当日记为妊娠第1天(足月为22天)或次日见阴道栓记为妊娠第1天,所有孕鼠以灯光:黑暗12h:12h交替循环,给予自由饮食和饮水。雌鼠于孕21天时,剖宫产取出胎鼠,作为早产鼠。高氧组持续输入氧气,FiO2＞0.95(测氧仪监测),用钙石灰吸收CO2,温度25～30℃,湿度60％-70%,每天开箱1小时,添加水及饲料,更换挚料。空气组置于空气中(FiO2为21%),饲养条件与高氧组相同。空气组和高氧组的代乳鼠每天交换,以免因高氧引起喂养能力下降。
2.实验分组及取材:新生鼠生后雌雄不分,12小时内随机分为空气组和高氧组,分组后4天、7天、14天将动物断颈处死取肺标本,每时间点每组8只。右肺组织取出用PBS冲洗后立即置于液氮罐中,置-80℃冰箱保存以作Westernblot之用;左肺组织冲洗后置入4%多聚甲醛中浸泡18～24小时固定,石蜡包埋后切片供组织学检查。
3.进行肺组织大体病理分级及肺损伤病理评分,普通显微镜下观察大鼠肺组织的形态学变化,并计算辐射状肺泡计数(Radial alveolar founts,RAC)。每个标本随机选取1张切片,每张切片取10次计数,取平均值。
4.采用Western blot检测肺组织中血管内皮生长因子及内皮抑素的蛋白表达。
[结果]
1.早产大鼠肺组织形态学检查
空气组大鼠随着日龄增长,肺发育逐渐成熟。生后4天肺尚处于囊泡期,肺间隔很厚,7天出现肺泡化,肺泡大小均一,肺间隔仍较厚,14天肺泡化成熟,肺间隔明显变薄。
高氧组大体病理分级提示随着时间的延长,损伤加重(x2=17.96,P＜0.0001),肺损伤病理评分也提示随着时间的延长,损伤加重(F=15.80,P＜0.0001)。
空气组随日龄增加肺泡计数增多,差异有统计学意义(F=9.03,P=0.0003),高氧组随日龄增加肺泡计数也增多,差异有统计学意义(F=13.25,P＜0.0001)。
空气组4天肺泡计数多于高氧组4天,差异有统计学意义(t=7.1,P＜0.0001),空气组7天肺泡计数多于高氧组7天,差异有统计学意义(t=8,P＜0.0001)。
2.VEGF的蛋白表达:空气组4天、7天VEGF蛋白含量明显高于14天,差异有统计学意义(F=22.17,P＜0.0001);4天时空气组VEGF蛋白的含量高于高氧组,差异有统计学意义(t=10.78,P=0.0085);7天时空气组VEGF蛋白的含量高于高氧组,差异有统计学意义(t=10.78,P=0.0085)。
3.ES的蛋白表达:空气组4天ES蛋白的含量高于14天、7天,差异有统计学意义(F=15.04,P＜0.0001);4天时ES蛋白的含量空气组高于高氧组,差异有统计学意义(t=6.69,P=0.0026)。
4.VEGF、ES的比值与肺泡计数的关系:肺泡发育早期,比值升高,肺泡发育成熟后,两者比值下降趋于平衡;高氧组,二者含量下降,比值无明显变化。
[结论]
1.在早产鼠肺发育早期,VEGF分泌占优势,肺泡发育成熟后,VEGF ES分泌减少,二者比值下降;VEGF与ES在蛋白表达水平有正相关性。
2.高氧使VEGF、ES表达下降,但VEGF分泌仍占优势,VEGF ES比值下降,可作为肺损伤的标志之一。