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目的：探讨钙蛋白酶在局灶性持续性脑缺血、脑缺血/再灌注损害中的作用及FNS的神经保护作用与其调节钙蛋白酶活性的关系，并阐明FNS对钙蛋白酶活性的调节机制。方法：采用颈内动脉线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉缺血及缺血/再灌注动物模型，运用免疫组化、免疫电镜、Western印迹、RT-PCR、神经元尼氏体染色及HE染色等方法，动态观察大鼠局灶性脑缺血及缺血/再灌注后钙蛋白酶特异性降解产物150kDa FBDP、钙蛋白酶I、钙蛋白酶II及CPN的免疫反应性、钙蛋白酶转位、缺血区脑组织病理变化，以及在应用FNS预处理后，对上述指标的影响，以阐明钙蛋白酶的异常激活在大鼠局灶性脑缺血及缺血/再灌注损害中的作用，探讨FNS在局灶性脑缺血及缺血/再灌注期间的神经保护作用及机制。同时动态观察FNS对大鼠局灶性脑缺血及缺血/再灌注后CPN-mRNA表达的影响，阐明FNS对钙蛋白酶活性调节的分子机制。结果：1．PI组缺血区150kDa FBDP的免疫反应性从缺血1h开始显著增高，以后随着缺血时间延长，不断增高。PI-FN组150kDa FBDP的免疫反应性从缺血1h也开始显著增高，以后随缺血时间延长不断增高，但与相应PI组相比，其增高程度明显减低。2．PI组钙蛋白酶I及钙蛋白酶II的免疫反应性在缺血1h出现显著增高，缺血3h后开始明显降低，至缺血6h以后，显微镜视野内阳性细胞基本消失。PI-FN组钙蛋白酶I及钙蛋白酶II的免疫反应性在缺血1h也出现显著增高，与PI组相应时点相似。缺血3h以后不断下降，但与其相应时点PI组相比，其降低程度明显减轻、减慢。直至缺血12h，阳性细胞才基本消失。3．持续性局灶性脑缺血后，PI组CPN的免疫反应性在缺血1h显著增高，缺血3h，其免疫反应性开始下降，至缺血6h降至基础水平，以后则不断降低，至缺血12h，降至基础水平以下，缺血24h，阳性细胞基本消失。PI-FN组在缺血1h CPN的免疫反应性较PI 1h组显著增高，缺血3h，其免疫反应性也开始下降，但仍然处于较高水平，直至缺血12h才降至基础水平，与PI组各相应时点相比，其降低明显减轻、减慢。缺血24h，仍有少量阳性细胞。<WP=7>4．I/R组150kDa FBDP的免疫反应性在再灌注1h后显著增高（近1倍），至再灌注3h保持稳定，再灌注6h以后不断增高。I/R-FN组150kDa FBDP免疫反应性在再灌注1～3 h也有显著增高，但其增高程度均明显低于其相应时点I/R组；再灌注6h以后，150kDa FBDP的免疫反应性开始下降，至再灌注12h达最低点。再灌注24h，其免疫反应性又再度增高。5．I/R组钙蛋白酶I及钙蛋白酶II的免疫反应性在再灌注1h后显著降低，至再灌注3h，仅少量细胞呈弱阳性。I/R-FN组钙蛋白酶I及钙蛋白酶II的免疫反应性在再灌注1h也有显著降低，并持续至再灌注3h，其降低程度减轻，再灌注6h至再灌注12h，钙蛋白酶I及钙蛋白酶II的免疫反应性开始迅速回升。再灌注24h后，其免疫反应性又出现下降。6．I/R组CPN的表达在再灌注1h后显著降低，并随再灌注时间延长不断下降，至再灌注24h，阳性细胞基本消失。I/R-FN组CPN的表达虽然在再灌注后逐渐下降，但均较I/R组相应时点显著增加。再灌注24h，CPN的表达迅速回升。7．PI组缺血1h神经元形态数量评分轻度增高，以后随着缺血时间延长，评分不断增高，至24h达最高。PI-FN组缺血1h，神经元形态数量评分无显著改变，至缺血12h，各组评分均比PI相应时点组显著降低。在缺血24h，其评分与PI相应时点组相似。8．I/R组从再灌注1h开始，神经元形态数量评分迅速增加，并随着再灌注时间延长，评分不断增高，至再灌注24h达最高。I/R-FN组再灌注1～3h，神经元形态数量评分轻度增加，其后趋于稳定。至再灌注24h，神经元形态数量评分再次增加。各组评分均显著低于I/R相应时点组。9. PI组CPN-mRNA在缺血1～3h表达显著增高，以后随着缺血时间延长，其表达不断下降，至缺血12h，其表达降到基础水平，缺血24h几乎消失。PI-FN组CPN-mRNA在缺血1～6h表达显著增高，以后随缺血时间延长，表达迅速下降，至缺血24h降至基础水平。与PI组相应时点相比，其表达明显增加。10．I/R组CPN-mRNA在再灌注1h表达增高，以后随着再灌注时间延长，表达不断下降，至再灌注12h降至最低水平。再灌注24h时，其表达明显回升。I/R-FN组CPN-mRNA在再灌注1～3h表达显著增高，再灌注6h表达下降，但仍显著高于与I/R组相应时点组。至再灌注12h，其表达也降至最低，与I/R组相似。再灌注24h，其表达迅速增高，较I/R组更显著。11． PI组缺血 1h，钙蛋白酶转位到靶点，尤其在核及核仁内较集中，超微结构轻度损害。 缺血 3h，钙蛋白酶转位增多，超微结构出现中度损害。缺血 12h，靶点处钙蛋白酶明显减少（可能为消耗），超微结构呈重度损害。PI-FN组在缺血 1h，钙蛋白酶转位与PI组相似，但其超微结构基本正常。缺血 3h，钙<WP=8>蛋白酶转位增多，超微结构呈轻度损害。缺血 12h，钙蛋白酶仍位于靶点，超微结构呈中～重度损害。12．PI组缺血1h，HE染色示缺血区呈轻度缺血改变。缺血3h，缺血区呈中度缺血改变。缺血6h，缺血区呈中重度缺血性改变。缺血12h，缺血区呈重度缺血改变。缺血24h，缺血区呈极重度缺血改变。PI-FN组缺血1h，缺血区无明显变化?