应用实时定量PCR方法检测APL PML-RARA mRNA水平的研究

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随着对白血病发病机制的深入研究以及治疗方案的改进,白血病治疗水平也不断提高,完全缓解率已明显上升,但仍有一部分患者最终复发。近十年研究发现,微小残留病(MRD)与白血病复发密切相关。应用全反式维甲酸(ATRA)联合化疗可使90%APL患者达到完全缓解,然而仍有5~15%患者会复发,可见检测MRD非常必要。PML-RARα融合基因是APL特异的分子学标志,检测PML-RARα融合基因不仅能够协助APL诊断,而且对该融合基因定量对MRD检测也有重要意义。传统形态学及常规PCR技术不能对其定量,所以研究新的检测方法是目前白血病诊断领域及检测MRD的热点课题。在本研究中,我们应用Taqman技术成功的建立了实时定量PCR方法,并验证了方法的稳定性和重复性。并应用该方法检测处于不同阶段的APL患者PML-RARα融合基因转录本表达水平,结果表明该法最低可检测出10个拷贝浓度的重组质粒,PML-RARαDoseN的最低敏感度为0.0025。经治疗获得缓解的APL患者,其PML-RARαDoseN出现明显下降,并随着巩固治疗的进行进一步下降。长期获得无病生存的患者,其PML-RARαDoseN <2×102,一旦该值>2×102,提示复发的可能性较大,因此我们设定2×102为APL患者达到分子水平缓解的阈值。实时定量PCR是一种准确、敏感、快速的方法,可用来诊断APL,判定其预后,及早预测复发,为MRD的检测提供了一种新的方法。
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