Ca2+/CaN途径在悬吊再负荷大鼠肌纤维类型转化中的作用

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目的:观察去负荷及再负荷过程中肌纤维类型组成、横截面积以及肌球蛋白重链蛋白表达的变化,探讨Ca2+/CaN信号对纤维类型组成及肌纤维大小的影响。方法:以雌性SD大鼠为研究对象,按体重配对原则随机分对照组(CON)、去负荷14天模型组(TS)、去负荷14天+自然站立14天组(NR)、去负荷14天+离心运动14天组(ER)以及去负荷14天+离心运动14天+环胞霉素组(ER+CsA)。采用ATPase染色和SDS-PAGE银染比较分析肌纤维类型组成及横截面积;免疫印迹分析slow-MHC、fast-MHC蛋白表达水平;酶偶法分析CaN及肌浆网Ca2+-A7Pase活性;钙离子探针检测红白肌肌浆中的[Ca2+]i及肌浆网的Ca2+转运能力。结果:1、去负荷14天,TS组腓肠肌Ⅰ型、Ⅱa型和Ⅱb型CSA分别减小42.2%、30.0%、17.9%。再负荷14天,ER组Ⅰ型CSA恢复到CON水平;三种再负荷方式都能使Ⅱa型CSA恢复到甚至超过CON水平;NR组和ER组使Ⅱb型CSA恢复到CON组113.3%和111.5%水平(P<0.05),ER+CsA组CSA恢复到CON组水平,与NR和ER组差异显著(P<0.05)。2、ATPase染色及电泳银染比较分析,去负荷时Ⅰ型和Ⅱa型比例减少(22.2%vs 27.3%:26.0%vs 16%),Ⅱb型显著性增多(27.2% vs 24.9%);再负荷后,离心+CSA恢复组Ⅱa型进一步下降(比对照组分别下降30.9%vs 18.8%),Ⅱb型仍处于较高水平,(高出对照组18.1%vs 33.9%)。3、与CON组相比,TS组腓肠肌slow-MHC蛋白表达显著下降(P<0.05)。不同条件下再负荷14天,与CON组和NR组相比,ER组和ER+CsA组slow-MHC都显著减少(P<0.05);与CON组相比,ER组和ER+CsA组fast-MHC显著性下降(P<0.05)。结论:1、去负荷14天使腓肠肌发生废州性萎缩,Ⅰ型对去负荷最敏感,慢肌容易发生废用性萎缩。2、再负荷离心运动及环保酶素激活Ca2+,并通过CaN调节肌纤维类型转化,调节肌纤维的肥大作用。3、PI3K/PKB以及GSK-3β参与Ca2+/CaN调节肌纤维类型及肥大反应。
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