【摘 要】
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目的:构建表达4-羟基苯乙酸-3-羟化酶A(4-Hydroxyphenylacetate-3-hydroxylase A,HHA)的重组菌株,进而以酪醇为底物,利用重组菌株转化生产羟基酪醇。方法:选择大肠杆菌BL21(D
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目的:构建表达4-羟基苯乙酸-3-羟化酶A(4-Hydroxyphenylacetate-3-hydroxylase A,HHA)的重组菌株,进而以酪醇为底物,利用重组菌株转化生产羟基酪醇。方法:选择大肠杆菌BL21(DE3)为模板来扩增HHA基因,经酶切后连接到表达载体p ET-28a中,获得重组表达载体p ET28a-HHA,将重组载体转化到感受态细胞BL21(DE3),在重组菌液中加入适量酪醇,利用胞内的重组酶对酪醇加羟基合成羟基酪醇,细胞离心后,分别采用薄层层析法和气质联用法检测上清液中羟基酪醇的转化结果。结果:IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE分析获得分子量分别为58.8和18.5 KDa的两条蛋白质条带。薄层层析法和气质联用法均检测到催化产物羟基酪醇的生成。对生物转化过程所涉及的部分条件进行了优化,找到了最优值:PH为6.5,温度为28℃,底物量50mg/L,底物加入时间为20h,选用助溶剂为聚乙二醇(体积分数0.5%)。在此条件下羟基酪醇的转化率为11.2%。结论:成功构建了表达HHA的重组菌株,该菌株可有效将酪醇转化为羟基酪醇。
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