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背景和目的：NaNO2和AsA是广泛应用的食品添加剂。NaNO2作为N-亚硝基物质的前体具有很强的遗传毒性和致癌性。AsA具有很强的抗氧化作用,可以通过阻止亚硝酸盐与仲胺的反应抑制N-亚硝基物质生成从而发挥抑癌作用。但是,一些研究表明NaNO2和AsA联合作用可以提高大鼠贲门癌和食管癌的发病几率,NaNO2单独作用较弱,但联合AsA作用时具有很强的致癌效应。本研究的目的是探讨NaNO2和AsA联合作用是否会增加人胃粘膜上皮发生细胞恶性转化的几率,这一过程是否与DNA氧化损伤有关,并分析其与突变型P53蛋白及P21(WAF1/CIP1)蛋白的关系。方法：1、分别以不同浓度的NaNO2和AsA作用GES-1细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法计算对GES-1细胞增殖活性及抑制率,利用SPSS软件分别计算出NaNO2和AsA对GES-1细胞24h的IC50浓度。2、采用2000mg/L NaNO2、100mg/LAsA单独及联合作用GES-1细胞24h后在倒置光学显微镜下观察细胞形态。3、采用2000mg/L NaNO2、100mg/LAsA单独及联合作用GES-1细胞24h,利用细胞免疫荧光方法测定8-OHdG水平,并利用Image-Pro Plus软件分析荧光强度进行定量分析。4、采用2000mg/L NaNO2,100mg/LAsA单独及联合作用GES-1细胞24h后,利用Western blot方法测定P21(WAF1/CIP1),突变型P53蛋白表达量,并利用ImageJ软件进行半定量分析。结果：1、低浓度(25mg/L)AsA促进GES-1细胞的增殖,高浓度(100mg/L和200mg/L)AsA则明显抑制细胞的GES-1增殖,呈现时间和剂量依赖性,随着作用时间的延长,抑制效果明显增加,72h抑制效果最为明显(P<0.05)。同样,NaNO2在低浓度(125mg/1)时促进GES-1细胞的增殖,而在高浓度时(1000mg/1)则抑制GES-1细胞增殖,呈现时间和剂量依赖性,随着作用时间的延长,抑制效果明显增加,72h抑制效果最为明显(P<0.05)。2、与空白对照组GES-1细胞、NaNO2单药组及AsA单药组相比,联合用药组贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,并且细胞周围出现碎片,细胞核和细胞质分界模糊,呈现核质融合状态。3、对照组GES-1细胞8-OHdG表达水平比较低,与对照组和单独用药组相比,联合用药组8-OHdG表达水平明显增强,且在GES-1细胞核、细胞质中均有表达,其中细胞质尤为显著。定量比较显示NaNO2+AsA联合用药组8-OHdG表达量明显高于对照组、单独用药组(P<0.05),低于SGC7901细胞组(P<0.05)。4、P21(WAF1/CIP1)蛋白在对照组、AsA组、NaNO2组、NaNO2+AsA联合用药组以及SGC7901组相对表达量分别为(2.58645±0.43588)、(1.20767±0.0.14443)、(1.08715±0.09889)、(0.430031±0.07228)以及(0.23462±0.0.04738)。统计学分析显示NaNO2+AsA联合用药组P21(WAF1/CIP1)蛋白表达量明显低于对照组、AsA组及NaNO2组(P均<0.05),与SGC7901组无统计学差异(P>0.05)。AsA组及NaNO2组P21(WAF1/CIP1)蛋白表达量明显低于对照组及SGC7901组(P均<0.05)。突变型P53蛋白在对照组、AsA组、NaNO2组、NaNO2+AsA联合用药组以及SGC7901组相对表达量分别为(0.36606±0.05713)、(0.30267±0.05774)、(0.76184±0.03512)、(1.10217±0.05774)以及(1.11674±0.06192)。统计学分析显示NaNO2+AsA联合用药组突变型P53蛋白表达量明显高于对照组、AsA组及NaNO2组(P均<0.05),与SGC7901组无统计学差异(P>0.05)。NaNO2组突变型P53蛋白表达量高于对照组及AsA组,低于联合用药组及SGC7901组(P均<0.05)。结论：体外实验中高浓度NaNO2和AsA联合作用可导致GES-1细胞DNA氧化损伤及突变型P53蛋白及P21(WAF1/CIP1)蛋白的异常表达,支持了以往的体内研究结论,即高浓度NaNO2和AsA联合使用可触发胃癌发生。