湖北5个地区锈赤扁谷盗磷化氢抗性比较及氧化酶系初探

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锈赤扁谷盗Cryptolestes ferrugineus(Stephens)广泛分布于世界各地,以温带和热带地区发生最重,幼虫和成虫均可危害破碎和受损伤的原粮,是我国主要的储粮害虫之一。目前,控制储粮害虫为害的主要措施为磷化氢熏蒸。由于粮仓较差的密封性及多次重复无效熏蒸造成的选择性压力使储粮害虫对磷化氢产生了严重的抗性。本文采集了湖北襄阳、钟祥、武汉、荆州及麻城5个不同地区锈赤扁谷盗种群,分别缩写为XYCF、ZXCF、WHCF、JZCF、MCCF;测定了各种群的磷化氢抗性水平;比较了不同抗性水平的锈赤扁谷盗种群体内过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)及超氧化物歧化酶(SOD)三种氧化酶在磷化氢熏蒸前后的变化;并克隆了玉米象过氧化氢酶基因片段。1.不同锈赤扁谷盗种群的磷化氢抗性通过磷化锌和浓硫酸反应制备磷化氢气体,排水集气法进行磷化氢气体收集。采用钼蓝比色法测得自制磷化氢气体的浓度为0.853mg/ml,符合后续实验要求。利用FAO推荐的方法对湖北5个地区的锈赤扁谷盗种群进行磷化氢毒力测定,结果表明,不同种群磷化氢抗性大小顺序为XYCF<ZXCF<WHCF<JZCF<MCCF,与敏感品系相比,各种群的抗性倍数分别为4.4、7.4、8.3、197.5及838.4倍,根据磷化氢抗性划分标准,依次属于敏感、低抗性、低抗性、极高抗性和极高抗性种群,不同地区的锈赤扁谷盗对磷化氢的抗性存在极大的差异。2.磷化氢熏蒸对锈赤扁谷盗体内三种氧化酶的影响采用SPSS17.0分别对熏蒸前试验种群的LC50及三种氧化酶活性两两变量进行双变量分析,结果表明:试验种群的LC50与CAT、SOD、POD三种酶之间存在显著简单相关性(P<0.05);CAT与POD之间不存在显著相关性(P>0.05)。5个种群CAT的动力学常数Km和Vmax差异显著,说明5个种群的CAT在水解H2O2方面有差异。磷化氢熏蒸对5个锈赤扁谷盗种群的三种氧化酶的活性均有影响,磷化氢抑制这些种群的CAT活性,提高SOD和POD的活性。由于参与H2O2分解的酶还有GST,本实验还不能直接证明磷化氢对CAT活性的抑制是造成锈赤扁谷盗死亡的原因。磷化氢对低抗性锈赤扁谷盗种群CAT活性的体内抑制中浓度I50值与对极高抗性种群的差异显著,由于存在抗性种群在磷化氢存在下呼吸率降低的可能,本实验还不能充分说明低抗性种群的CAT对磷化氢的敏感性高于极高抗性的。3.玉米象过氧化氢酶基因片段克隆用一对简并引物扩增得到玉米象Sitophilus zeamais(Motschulsky)的基因片段长为715bp,推测编码238个氨基酸。经NCBI上同源性分析表明,扩增的基因片段属于过氧化氢酶基因片段,与同为储粮害虫赤拟谷盗Tribolium castaneum(Herbst)的过氧化氢酶基因序列的同源性高达82%,但用该引物未能得到锈赤扁谷盗过氧化氢酶基因片段。
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