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随着我国社会经济水平的发展和进步,食品安全越来越得到民众和政府的关注,食品安全问题已经上升到国家战略的高度。在这种形势下,多种食品安全检测技术也得到一定程度的发展,侧向层析方法(Immunochromatographic assay,ICA)是建立在层析技术和免疫学抗原抗体特异性反应基础上的一种快速分析技术,其特点是操作简单、反应快速、不需要专业技术人员和仪器、检测结果直观准确、检测成本低、容易被基层掌握并使用,2015年新修订的《中华人民共和国食品安全法》已经明确了食品安全快速检测方法的法律地位。传统的以胶体金(Colloidalgold,CG)作为信号输出的免疫层析试纸条检测灵敏度不高,一般只能用于定性分析。随着光学检测仪器的小型化和新型信号载体的出现,越来越多的新型荧光标记材料被报道和尝试应用,但是基于新型荧光标记材料制备的免疫层析产品在市场中应用较少,有关新型荧光标记材料本身在产业化上的优点和局限性的报道寥寥无几。因此,本研究基于多种标记材料制备黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)免疫层析试纸条,综合评价各种试纸条的性能和标记材料的产业化前景。基于目前免疫层析试纸条一般只能进行定性或定量检测,本研究选择盐酸克仑特罗(Clenbuterol,CLE)为模型,探索开发集成化同时定性定量检测试纸条。第一章引言对AFB1的理化性质、危害、污染情况和检测方法进行了介绍;对不同标记材料在免疫层析上的应用及同时定性定量试纸条的研发背景和研究意义进行了概述。第二章基于免疫学方法中的竞争抑制检测模式,系统地分析了 CG、荧光微球(Fluoresceinmicrospheres,FM)、时间分辨荧光微球(Time-resolved fluorescent nanobeads,TRFN)和量子点微球(Quantummicrospheres,QM)这四种新型标记材料作为信号载体在制备AFB1免疫层析试纸条上的优缺点。本研究确定了四种材料制备试纸条的最佳工艺参数,CG-ICA、FM-ICA、TRFN-ICA和QB-ICA四种免疫层析产品在玉米样本中AFB1的半抑制率(Half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为 0.15 ng/mL、0.08 ng/mL、0.014 ng/mL 和 0.03 ng/mL,其中TRFN-ICA的灵敏度最高。但是通过比较四种产品的精密度和稳定性,QM制备的AFB1试纸条的IC50稳定在0.03～0.05 ng/mL之间,具有较宽的检测线性范围(0.01-0.5ng/mL),检测时间为15分钟,产品加速保存稳定。结果表明QM是适用于产业化生产的新型标记材料,其具有灵敏度高、易于标记和分离、稳定性好的优点,在基于检测小分子物质的免疫层析试纸条上具有较好的应用价值和市场前景。第三章以CLE为模型,采用CG和TRFN作为标记材料建立了一套集成化的免疫层析分析系统,可以同时对CLE进行定性和定量检测。通过优化抗体标记浓度、抗原量和探针浓度,得到两种探针在试纸条上的最佳实验条件。当CG和TRFN探针同时存在于试纸条上时,后者对CG探针的定性检测灵敏度没有影响。但是,CG探针可以影响基于TRFN探针的试纸条定量检测的线性范围。该集成化检测试纸条可以同时对样本中的CLE进行定性和定量检测。当试纸条T线抗原浓度为0.4 mg/mL,CG探针浓度为1.2μg/mL,TRFN探针浓度为0.68μg/mL时,集成试纸条的定性检测灵敏度为0.5 ng/mL,定量检测限为0.04 ng/mL,定量检测范围为0.1～2.7 ng/mL。该方法对食品安全检测领域的大规模样品筛选和阳性监测具有重要意义。第四章对全文工作进行了总结和展望。系统和全面的分析了四种标记材料在产业化上的应用,并研究了双信号探针的集成化使用。评价不同标记材料的产业化前景具有十分重要的意义,探针集成化拓宽了快速检测产品的功能性和应用范围,对企业产品开发具有指导作用。