桑椹(Mori Fructus)为桑科植物桑Morus alba L.的干燥果穗,是传统的中药材之一,在我国资源非常丰富,全国大部分地区均有分布。目前药材市场流通的桑椹药材商品规格、等级混乱,没有明确的划分标准,除选货和统货两种规格外,部分市场还存在不符合药典规定的青桑椹和白桑椹。本文建立桑椹药材商品规格等级标准,并系统研究了桑椹中主要活性成分多糖的提取工艺、分离纯化、结构特征及抗氧化活性,为规范和提高桑椹药材商品质量及桑椹药材深入开发利用提供科学依据。主要研究内容如下:1.桑椹药材商品规格等级标准研究。通过文献调研、市场调研和产地调研,在“基于《药典》、市场第一、简便实用”三个原则的指导下,制定了桑椹药材商品规格等级标准,选择桑椹药材个头大小、饱满度、颜色及糖性大小等为考核指标,将桑椹药材分为选货和统货两个规格。选货“长1.5~2.0 cm,直径0.6~0.8 cm。表面暗紫色”,统货“表面黄棕色、棕红色或暗紫色”。2.桑椹多糖的提取工艺研究。采用单因素及正交试验法对桑椹多糖的提取工艺进行了研究,获得最佳提取工艺为:提取温度100℃,料液比1:12,提取3次,每次3 h,该条件下多糖得率为16.87%。3.桑椹多糖分离纯化及组成分析。桑椹经水提醇沉、Sevag法脱蛋白、活性炭脱色后,得到粗多糖MFP。MFP经DEAE-纤维素柱和Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化,分得多糖组分MFPA-1,在HPLC图谱上成单一对称峰,表明该组分达到了一定的均一纯度。紫外扫描结果显示MFPA-1不含蛋白质和核酸。采用色谱学手段,研究了MFPA-1的单糖组成,结果表明MFPA-1主要由葡萄糖(D-Glu)组成,含有少量的鼠李糖(L-Rha)、阿拉伯糖(L-Ara)、甘露糖(D-Man)和半乳糖(D-Gal),各单糖对应物质的量比为93.4:1:1.1:1.8:2.7;测定了MFPA-1的糖和糖醛酸含量,结果是MFPA-1含糖量为80.9%,糖醛酸含量为5.3%。4.桑椹多糖MFPA-1理化性质及结构分析。运用GC、HPLC、UV、IR、高碘酸氧化、Smith降解和刚果红实验等现代分析手段,对桑椹多糖MFPA-1的理化性质及结构特点进行了研究,结果表明,MFPA-1为白色固体,易溶于水,不溶于丙酮、乙醇等有机溶剂;不含氨基酸和蛋白质;不含淀粉。MFPA-1分子量为127.9 kDa。推测MFPA-1的主链由(1→2)-Glu组成,侧链由(1→2)-Man、(1→2)-Rha、(1→3)-Ara和(1→3)-Gal组成。MFPA-1由α、β两种构型吡喃糖苷键连接,具有三股螺旋分子结构,且有糖类的红外特征吸收峰。5.桑椹多糖的抗氧化活性研究。研究了桑椹粗多糖MFP的体外抗氧化活性,结果表明,MFP具有一定的抗氧化活性,DPPH自由基清除能力较强,在浓度为0.9 mg/mL时清除率为95.42%,与阳性对照Vc接近。而·OH自由基清除能力、还原能力和总抗氧化能力与Vc相比较弱。在一定浓度范围内,MFP的抗氧化活性与其浓度呈正相关。