马来西亚无刺蜂Heterotrigona itama蜂胶中萜类成分的优化提取、定量及生物活性检测

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无刺蜂蜂胶(Geopropolis)是由蜜蜂科(Apidae)无刺蜂属(Trigona)的无刺蜂昆虫通过采集不同植物的嫩芽、树脂的分泌物以及自然中的土壤颗粒,混入自身分泌物形成的粘滞度较高的固形物质。受无刺蜂蜂种、地理环境、当地植物胶源差异以及不同的采胶时间等内在、外在因素影响,无刺蜂蜂胶有着独特而又复杂的化学组成,主要成分包括萜类、黄酮类、酚酸类、植物甾醇类和氧杂蒽酮类化合物,以及维生素、矿物质、游离脂肪酸、可水解单宁、皂甙、生物碱等。无刺蜂蜂胶复杂的化学组分决定了其多种活性,如抗氧化、抑菌、抗肿瘤、抗增殖、抗炎、抗病毒、抗突变等。与西方蜜蜂(Apis mellifera)所采集的蜂胶(Propolis)不同,无刺蜂蜂胶中的萜类化合物丰富含量较高,是其生物活性的重要物质基础及挥发性成分的主要来源,然而当前相关研究较为不足。Heterotrigona itama是一种广泛分布于热带地区的无刺蜂蜂种,本实验以采集于马来西亚沙捞越州的无刺蜂H.itama所产蜂胶为研究对象,针对其萜类成分优化提取及相关活性进行研究。主要研究结果如下:1.通过单因素实验设计以及响应面优化无刺蜂H.itama蜂胶中萜类成分的提取效率得出最佳工艺参数:95%的乙醇浸提蜂胶在浸提时间为72 h、料液比1:30 g/mL、浸提3次时,无刺蜂H.itama蜂胶中的萜类物质提取率最高(46.44±0.07%)。2.根据实验室现有的五种萜类标准品和制备纯品,通过LC-MS/MS(液相色谱-二级质谱联用)对无刺蜂H.itama蜂胶中的主要萜类成分相对含量进行分析,结果表明无刺蜂H.itama蜂胶含有(24E)-Dammara-20,24-dien-26-al 0.926 mg/g,α-香树精 1.029 mg/g,24(E)-cycloart-24-ene-26-o1-3-one 0.304 mg/g,20-hydroxy-24-dammaren-3-one 0.343 mg/g,龙脑香醇酮0.441 mg/g。3.利用体外清除自由基实验和细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞炎症实验模型,评价无刺蜂H.itama蜂胶的抗氧化和抗炎症活性。体外实验表明H.itama蜂胶优化提取物的DPPH自由基和ABTS自由基清除率ICso分别为630.31±0.76 μg/mL和321.58±3.67μg/mL;细胞实验结果表明H.itama蜂胶优化提取物可能通过抑制促炎症基因iNOS(诱导型一氧化氮合酶)、IL-1β(白介素-1β)、IL-10(白介素-10)mRNA相对表达和促进抗氧化基因HO-1(血红素氧合酶1)mRNA相对表达来抑制炎症反应。综上,本课题优化了无刺蜂H.itama蜂胶中的萜类成分提取工艺参数;检测了无刺蜂H.itama蜂胶萜类优化提取物中的五种主要萜类成分含量;验证了无刺蜂H.itama蜂胶萜类优化提取物具有较好的抗炎活性和一定的抗氧化性。该研究结果可作为理论依据来促进无刺蜂H.itama蜂胶资源的开发与产品生产应用。
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