树莓是我国新兴的第三代果树,具有高营养、高附加值等优点。凯欧黑树莓具有产量高、果型大等特点,但盐碱地适应能力不足。为了改良树莓品种,提高其对盐碱土壤的适应能力,扩大在土壤盐碱化严重地区的种植面积,对已获得的树莓松散型愈伤组织进行化学诱变(0.15%EMS),并给与高NaCl(2%)环境进行耐盐细胞的筛选,得到了耐盐突变细胞。通过胚状体的诱导形成体细胞胚,最终获得了8个高耐盐突变体。通过1号、2号、8号、9号、10号、11号、12号、13号树莓耐盐突变植株生长指标的测量,发现:9号突变体的叶面积(2.93 cm~2)极显著小于对照(9.6 cm~2),叶柄长(2.22cm)显著短于对照(3.00cm)。花粉粒的显微观察显示,已开花的9号、10号、11号和12号耐盐突变植株与对照没有观察到明显变化。通过树莓RAPD多态性分析发现:供试的8个突变体的遗传物质均发生了的变异。经过20个引物的扩增,有13对引物扩增效果较好,对照组凯欧树莓共扩增出122条条带。其中1号突变体比对照新增21条条带,减少14条条带;2号突变体比对照新增26条,减少9条;8号突变体比对照新增23条,减少14条;9号突变体比对照新增11条,减少13条;11号突变体比对照新增10条,减少20条;12号突变体比对照新增15条,减少28条;13号突变体比对照新增18条,减少13条。建立了重复性好的树莓双向电泳体系,并针对IEF程序中的聚焦时间、聚焦电压、盐桥的使用、上样量等方面进行了针对树莓叶片组织的优化。优化后的程序为:10000V,8h,更换盐桥,上样量为0.5mg。为了从蛋白质组学角度分析耐盐植株的深层变化,对表型差异明显的9号植株与对照植株叶片的蛋白质组学分析。结果显示:1.共找到差异蛋白斑点30个,包括20个上调点,10个下调点。经过MS质谱分析,26个蛋白质点被成功鉴定,其中16个点为光合作用相关蛋白(二磷酸核酮糖羧化酶,二磷酸核酮糖羧化酶活化酶,磷酸核酮糖激酶,光系统II蛋白复合体,捕光色素a/b结合蛋白),3个点为能量产生相关蛋白(ATP合酶),2个点为氮代谢相关蛋白(谷氨酰氨合酶),以及生长及形状控制蛋白(肌动蛋白)、植物过敏反应相关蛋白(Harpin蛋白结合蛋白)、过氧化物酶(2-cys过氧化物氧还蛋白)、酶活调节因子(14-3-3蛋白)、分子伴侣蛋白(Cpn7蛋白)等各1个点。2.对26个成功鉴定的蛋白质点进行拟南芥蛋白数据库映射蛋白寻找,成功找到21个蛋白点的映射蛋白。对找出的映射蛋白进行GO功能注释。结果显示上调蛋白主要分布在叶绿体类囊体中,参与光合作用、病原入侵、寒冷响应等生物过程,并具有ATP结合活性、RNA聚尿嘧啶结合活性、叶绿素结合活性;下调蛋白分布在叶绿体基质中,但不限于类囊体,参与细胞分裂素响应和钙离子响应,具有蛋白结合活性和钙离子结合活性。KEGG通路分析表明上调蛋白质主要参与多糖降解通路,下调蛋白主要参与甘油磷酯代谢通路。3.寻找了21个拟南芥映射蛋白所对应的基因。上调蛋白相关基因为PSBO2、CAB3、RCA、LHCB6、PSBP-1、CYB561、FIB4、2-Cys Prx B、psbC;下调蛋白相关基因为PRK、CPN20、GS2、ACT7。综上所述,9号植株对于盐胁迫的响应方式为上调维持光合系统稳定性、渗透调节能力、信号传导以及病原入侵的相关蛋白,并改变2种多效调节因子的含量。这些过程与能够对病原入侵和寒冷进行响应的RCA、CAB3、PSBP-1、2-Cys Prx B等基因以及对细胞分裂素进行响应的PRK、GS2基因的表达调控有关。