【摘 要】
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目的:旨在研究熊果酸（UA）治疗肝细胞肝癌的作用机制。方法:（一）运用网络药理学相关方法筛选癌痛消的主要有效成分,并分析出癌痛消主要有效成分可能作用于肝细胞肝癌的核心靶基因及富集的主要通路,最终得出癌痛消主要有效成分发挥抑制肝细胞肝癌作用的可能通路。（二）采用肝癌Bel-7402细胞进行培养,并分为对照组（不加药物）和实验组（15μM-30μM熊果酸）,通过MTT法观察不同浓度熊果酸对肝癌Bel-
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目的:旨在研究熊果酸（UA）治疗肝细胞肝癌的作用机制。方法:（一）运用网络药理学相关方法筛选癌痛消的主要有效成分,并分析出癌痛消主要有效成分可能作用于肝细胞肝癌的核心靶基因及富集的主要通路,最终得出癌痛消主要有效成分发挥抑制肝细胞肝癌作用的可能通路。（二）采用肝癌Bel-7402细胞进行培养,并分为对照组（不加药物）和实验组（15μM-30μM熊果酸）,通过MTT法观察不同浓度熊果酸对肝癌Bel-7402细胞增殖的影响;通过集落形成实验观察不同浓度熊果酸对肝癌Bel-7402细胞集落形成的影响;通过Hoechst 33342染色法观察不同浓度熊果酸对肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响;通过流式细胞术观察熊果酸对肝癌Bel-7402细胞凋亡率的影响;通过RT-qPCR和WB观察在对肝癌Bel-7402细胞给予不同浓度熊果酸刺激24h后对P53细胞凋亡信号通路相关分子P53、Bcl-2、Casp-3 mRNA及蛋白表达水平的影响。结果:（一）通过网络药理学筛选出癌痛消主要有效成分为熊果酸,并进一步分析出熊果酸可能作用于肝细胞肝癌的核心靶基因为P53,P53信号通路也是富集的主要信号通路,根据预测结果及前期研究结果推测熊果酸可能通过P53/Bcl-2/CASP3信号通路发挥治疗肝细胞肝癌的作用。（二）15μM-30μM的UA对肝癌Bel-7402细胞的抑制作用显著,且具有浓度依赖性;与对照组相比,实验组不同浓度UA均能不同程度抑制肝癌Bel-7402细胞集落形成,且随着熊果酸浓度的增大集落形成逐渐较少。细胞荧光染色和细胞凋亡检测实验显示:与对照组相比,15μM-30μM熊果酸能显著促进细胞凋亡,且随着UA浓度加大凋亡越显著。RT-qPCR及WB结果显示:与对照组相比,熊果酸可调节肝癌Bel-7402细胞中P53、Bcl-2和CASP3 mRAN及蛋白的表达,其中熊果酸可促进肝癌Bel-7402细胞中P53和CASP3 mRAN及蛋白过表达,抑制Bcl-2 mRAN及蛋白的表达。结论:（1）网络药理学预测发现癌痛消中主要有效成分熊果酸可能通过P53信号通路发挥抑制肝细胞肝癌作用。（2）熊果酸可显著抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖,呈药物浓度依赖性,并激活P53介导的Bcl-2/CASP3线粒体凋亡途径诱导肝细胞肝癌凋亡。（3）癌痛消可能通过P53/Bcl-2/CASP3信号通路发挥抑制肝细胞肝癌作用。
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