目的:特应性皮炎是一种与菌群密切相关的慢性感染性疾病,其易发作于人体肘窝和腘窝部。本研究拟以人体肘窝部皮肤为研究对象,探讨健康个体和特应性皮炎患者微生物种类和菌群结构差异,并建立皮肤菌群的分离培养方法,从而为特应性皮炎的临床检验和治疗提供依据。方法:(1)选取2018年10月至2019年11月在广东省医院就诊的特应性皮炎患者26例和健康对照51例,采取肘窝部皮肤标本提取DNA进行16S rRNA基因扩增子测序,了解本地区健康个体和特应性皮炎患者人体肘窝部皮肤的微生物种类和菌群结构差异。(2)选取2018年10月至2019年11月健康人肘窝部皮肤标本进行微生物培养,MALDI-TOF质谱技术进行菌种鉴定,探讨生长温度、气体环境、pH值、盐浓度和培养基等环境条件下对于微生物种类和数量的影响,从而探求最适的培养条件和培养方法。(3)以建立的皮肤菌群培养方法进行微生物培养方法,选取2019年11月至2020年2月在广东省医院就诊的特应性皮炎患者36例和健康对照志愿者26例,采取其肘窝部皮肤标本并进行定量计数的微生物培养,探讨健康个体和特应性皮炎患者可培养的微生物种类和菌群结构差异,探索皮肤标本定量培养在特应性皮炎诊断和治疗过程的意义。结果:(1)16S rRNA基因扩增子测序结果表明健康人群的肘窝部皮肤菌群物种多样性比AD病例组的高;通过对AD病例组和健康对照组的比较,发现两者在门、纲、目、科、属、种均有明显差异。在门水平上,有2个类群的相对丰度在两者间有显著差异,表现为变形菌门(Proteobacteria)在健康对照组的丰度显著高于特应性皮炎病例组,而厚壁菌门(Firmicutes)的丰度则显著低于特应性皮炎病例组;在属水平,AD组中关键微生物类群是葡萄球菌属(Staphylococcus)和芽胞杆菌属(Bacillus),而健康对照组中关键微生物类群则为棒状杆菌属(Corynebacterim)、皮肤杆菌属(Cutibacterium)、奇异球菌属(Deinococcus)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、副球菌属(Paracoccus)、不动杆菌属(Acinetobacter)和莫拉菌属(Moraxella)等。(2)研究结果表明健康人体肘窝部皮肤菌群适宜的培养条件为:最适生长温度为28-32℃,最适生长pH值为7,培养时间5-7天。盐浓度对某些葡萄球菌的影响不大,但可能影响革兰阴性杆菌生长,尤其是盐浓度为5%以上时,对细菌总数的影响显著。健康人体肘窝部皮肤菌群中的大多数细菌在以下的培养基生长效果良好,分别是血平板、普通巧克力、BCYEα、R2A和改良R2A培养基;其中寡营养的R2A和改良R2A有利于延缓革兰阳性球菌生长和促进革兰阴性杆菌的检出;血平板和普通巧克力有利于链球菌属和嗜血杆菌属等营养要求苛刻的特殊类群细菌的检出;而厌氧条件有利于皮肤杆菌属(Cutibacterium)[之前分类为丙酸杆菌属(Propionibacterium)]等厌氧菌的检出。(3)健康人体肘窝部皮肤菌群微生物菌落计数普遍在之40-50,000 cfu/cm2(中位数为325.45 cfu/cm2),而AD患者微生物菌落计数普遍在47.1-47,157 cfu/cm2之间(中位数为4,350 cfu/cm2),差异无统计学差异。但在微生物种类上,特应性皮炎患者皮肤中金黄色葡萄球菌的检出和数量显著增高,且具有统计学差异。结论:(1)健康人群与特应性皮炎患者的肘窝部皮肤菌群的微生物数量、种类和菌群结构差异存在显著差异,其中健康人群的皮肤菌群微生物数量、种类和菌群结构存在较大的个体差异,而特应性皮炎患者微生物数量显著增高,且金黄色葡萄球为优势菌群,其菌群总体分布较均匀,种类单一,且个体差异不大;故实验证据进一步支持“特应性皮炎是以金黄色葡萄球为主要病原体的慢性复发性的感染性疾病”这一新论点。(2)初步建立了肘窝部皮肤定量微生物培养方法,且肘窝部皮肤菌群的微生物数量、种类和菌群结构,可作为特应性皮炎诊断和治疗的重要依据。