山茶花降血脂、抗氧化功能及有效成分分析

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本文以山茶花花瓣和叶片为试验材料,利用95%乙醇回流提取,提取物水溶后以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水饱和正丁醇依次萃取,获得5种萃取物,比较研究这5种萃取物的降血脂及抗氧化能力,并分析其有效成分。以样品体外结合三种胆酸盐的能力作为权衡其降血脂效果的指标;以样品清除DPPH·、·OH的能力以及还原力的大小作为考察其抗氧化活性的指标。经相关性分析,萃取物的降血脂和抗氧化功能与其所含的多酚、黄酮具有显著正相关性;再通过LC-MS进一步分析表明,儿茶素和表儿茶素可能是山茶花降血脂、抗氧化功能的主要活性成分。并取得以下主要研究结果:1、经回流提取,蒸发浓缩后得浸膏,由此可计算出山茶花花瓣5种萃取物得率分别为:乙酸乙酯萃取物1.210%、正丁醇萃取物1.701%、石油醚萃取物0.790%、氯仿萃取物0.187%、蒸馏水萃取物0.330%。山茶花叶片5种萃取物得率分别为:乙酸乙酯萃取物6.058%、正丁醇萃取物6.631%、石油醚萃取物0.362%、氯仿萃取物1.733%、蒸馏水萃取物1.904%。2、降血脂研究:胆酸盐的测定采用紫外分光光度法,三种胆酸盐标准曲线的R2分别为牛磺胆酸钠0.9953,甘氨胆酸钠0.9969,胆酸钠0.9989,并且该测定方法的稳定性和重现性都比较好。在体外模拟人体胃液消化环境条件下,以降血脂药物的主要成分考来烯胺作为对照,分别比较了5种萃取物在体外胃环境下结合三种胆酸盐的能力。结果表明,山茶花花瓣各萃取物降血脂能力整体比叶片强,花瓣各萃取物中乙酸乙酯萃取物活性最强,降血脂能力最好,其次是正丁醇萃取物;花瓣乙酸乙酯和正丁醇萃取物结合牛磺胆酸盐、甘氨胆酸钠和胆酸钠的效果依次是同剂量考来烯胺的84.44%和71.33%、60.99%和54.14%、96.95%和70.29%。3、抗氧化研究:选取清除DPPH·和·OH的能力以及还原力大小来评判山茶花抗氧化效果。结果表明,山茶花花瓣各萃取物中清除自由基能力最强的是乙酸乙酯和正丁醇萃取物,均表现出良好的体外抗氧化活性;在试验浓度梯度内,清除率随溶液浓度的增大而升高,呈剂量效应关系;清除DPPH·能力最强的是花瓣正丁醇和乙酸乙酯萃取物,当样品的浓度达到200 μg/mL时,花瓣正丁醇和乙酸乙酯萃取物清除DPPH·能力分别为93.31%和83.71%;叶片正丁醇和乙酸乙酯萃取物清除DPPH·能力分别为76.61%和61.01%。对·OH的清除能力上,发现低浓度时对·OH清除率大于Vc,高浓度时小于Vc,随着萃取物浓度的增大,清除率涨幅缓慢。山茶花花瓣和叶片对铁离子均具有一定的还原能力,且随着样品浓度的增大而增大,还原能力呈剂量效应关系;在相同浓度下,山茶花花瓣各萃取物的还原能力是叶片的2-3倍。4、主要成分测定结果表明:山茶花花瓣正丁醇萃取物中多酚、黄酮含量分别为27.92%、39.56%,乙酸乙酯萃取物中多酚、黄酮含量分别为32.32%、33.16%;山茶花叶片正丁醇萃取物中多酚、黄酮含量分别为11.64%、21.53%,乙酸乙酯萃取物中多酚、黄酮含量分别为10.43%、13.16%。山茶花花瓣和叶片降血脂、抗氧化活性最强的正丁醇和乙酸乙酯萃取物中多酚和黄酮的含量明显高于其它三种萃取物,经相关性分析表明,多酚和黄酮含量与降血脂、抗氧化功能均呈显著性正相关(P<0.05)。5、活性成分分析结果:通过LC-MS和HPLC分析表明,山茶花花瓣正丁醇和乙酸乙酯萃取物中都可能含有儿茶素和表儿茶素,正丁醇萃取物中儿茶素、表儿茶素含量分别达11.72%、31.37%;乙酸乙酯萃取物中儿茶素、表儿茶素含量分别达7.65%、52.14%。并且,儿茶素和表儿茶素均具有较强的降血脂和抗氧化能力,其中降血脂能力是同剂量考来烯胺的1-2倍,抗氧化能力也明显大于Vc。
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