【摘 要】
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鹿茸具有较高的药用价值和经济价值,其生长依赖鹿茸间充质干细胞（MSCs）的增殖分化。在人工饲养的环境中鹿茸可能受到各种不利因素影响并发生氧化应激进而鹿茸的产量与质量受到影响。褪黑素（MLT）具有广泛的生理学作用,许多研究表明其具有显著的抗氧化功能。本研究以梅花鹿鹿茸间充质细胞为研究对象,采用活性氧（ROS）检测试剂盒等试剂盒检测了氧化应激指标,建立了H2O2诱导的鹿茸MSCs氧化应激模型,探究了M
【基金项目】
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国家自然科学基金,项目名称:褪黑激素介导间充质干细胞增殖与分化调控鹿茸再生的分子机制研究,项目编号:31972533
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鹿茸具有较高的药用价值和经济价值,其生长依赖鹿茸间充质干细胞（MSCs）的增殖分化。在人工饲养的环境中鹿茸可能受到各种不利因素影响并发生氧化应激进而鹿茸的产量与质量受到影响。褪黑素（MLT）具有广泛的生理学作用,许多研究表明其具有显著的抗氧化功能。本研究以梅花鹿鹿茸间充质细胞为研究对象,采用活性氧（ROS）检测试剂盒等试剂盒检测了氧化应激指标,建立了H2O2诱导的鹿茸MSCs氧化应激模型,探究了MLT对H2O2诱导的鹿茸MSCs氧化应激的保护作用。使用q PCR、流式细胞术、Western Blot、荧光强度分析等分子生物学手段研究了MLT的作用机制。研究结果如下:（1）MSCs氧化应激模型的建立:与对照组相比,400μmol/L的H2O2处理2 h会引起MSCs的细胞活力显著下降（P＜0.01）,细胞内ROS水平上升2.524±0.056倍（P＜0.05）,细胞内丙二醛（MDA）水平上升1.176±0.046倍（P＜0.05）,细胞内ATP水平、线粒体拷贝数及线粒体膜电位显著下降（P＜0.05）。（2）利用100 ng/mL的MLT预处理12 h可显著缓解鹿茸MSCs的氧化应激,显著提高细胞活力,抑制细胞内ATP水平的下降,维持细胞内线粒体数量,保护线粒体功能,抑制细胞凋亡（P＜0.05）。（3）利用luzindole（Luz）阻断褪黑素受体的生理功能,结果表明细胞内ROS、MDA水平等氧化应激表型较之受体阻断前有显著上升;线粒体数量及线粒体膜电位较之受体阻断前有显著下降（P＜0.05）。（4）MLT能激活Nrf2通路,上调Nrf2、Keap1及HO-1等基因的表达,而上述基因的表达在褪黑素受体阻断后受到抑制（P＜0.05）。同时凋亡基因的表达较之受体阻断前也显著增加（P＜0.05）。综上,MLT能维持鹿茸MSCs的线粒体数量与功能,通过褪黑素受体途径激活Nrf2通路,抑制鹿茸MSCs的氧化应激与细胞凋亡。
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