研究目的:1 在现有的设备及试验条件下,改进胰岛分离、纯化技术,获得较大量的有活性的胰岛团簇。探讨胰岛分离纯化方法及胰岛细胞移植物质量的鉴定方法。2.通过体外人胰岛细胞培养及糖刺激胰岛素释放试验,探讨免疫抑制剂对人胰岛细胞的直接毒性作用,旨在筛选适用于胰岛细胞移植的免疫抑制剂。设计既能有效的免疫抑制且对胰岛存活毒性小的免疫抑制方案。为临床移植提供理论依据。 研究方法:完善尸体胰腺切取技术,减少冷热缺血时间,经胰导管逆行注入胶原酶,采用胆总管内逆行灌注胶原酶消化分离胰岛,Ficoll间断密度梯度离心法提纯胰岛,采用DTZ和AO-PI联合染色及糖刺激胰岛素释放试验鉴定胰岛的纯度、数量和活率和功能质量。通过人胰岛细胞同不同免疫抑制剂分别共同培养后的糖刺激胰岛素释放试验,ELISA检测培养液中胰岛素含量比较,以探讨免疫抑制剂对胰岛素的毒性作用。 结果:1.人的胰腺经消化分离提出后胰岛产量为80×1000胰岛当量,平均活率在95%以上,纯度在80%以上。胰岛素释放试验显示高糖刺激后胰岛素释放量为低糖的2.8倍,表明胰岛细胞功能良好。2.与对照组相比,各药物添加组胰岛素释放均有变化,除5ng/ml它可莫斯组的在低糖浓度时胰岛素释放增大外,其余各组在低糖、高糖浓度作用下胰岛素释放减少。低糖组,与对照组相比只有25ng/ml 它可莫斯组有统计学意义(P<0.05);高糖作用下,高浓度的环孢霉素、雷帕霉素、霉酚酸酯和中、高它可莫斯同对照组有统计学差异(P<0.05),其他各组没有统计学意义。在相同药物随着浓度的增高而减少,但是没有统计学意义。与对照组相比,所有添加药物组刺激指数都下降,只有高浓度(25ng/ml) 它可莫斯组有统计学意义(P<0.05),其余