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目的从偏头痛发病机制的三叉神经血管学说入手,以硝酸甘油型偏头痛实验大鼠模型为研究对象,应用“和解止痛方”进行干预,观察大鼠血浆、中脑、三叉神经节的疼痛相关因子、神经肽以及组织病理的变化,探索“和解止痛方”治疗偏头痛的多靶点作用机制。方法1.观察“和解止痛方”对实验性偏头痛大鼠行为学的影响:48只健康Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为6组,每组8只:空白对照组(A)、偏头痛模型组(B)、欧立停对照组(C)、“和解止痛方”高剂量组(D)、中剂量组(E)、低剂量组(F)。A、B组给予生理盐水灌胃,D、E、F组给予“和解止痛方”高、中、低剂量灌胃,每天1次,连续14天;第14天灌胃后,B、C、D、E、F组大鼠给予皮下注射硝酸甘油,A组皮下注射生理盐水;C组注射硝酸甘油后立即给予欧立停灌胃。1小时后开始观察行为学变化:挠头、咬尾、爬笼、往返症状,连续观察半小时,对症状计数评分并进行统计分析;2.观察“和解止痛方”对偏头痛大鼠血浆中CGRP、5-HT、β-EP、SP、CCK的影响:造模后2小时,右心耳采血,应用ELISA法检测血浆中CGRP、5-HT、β-EP、SP、CCK的含量,并进行统计分析;3.观察“和解止痛方”对偏头痛大鼠中脑及三叉神经节中CGRP、SP、CCK mRNA的影响:造模后2小时,取实验大鼠中脑及三叉神经节,利用PCR技术检测各组大鼠中脑及三叉神经节CGRP、SP、CCK mRNA的表达,并进行统计分析;4.观察“和解止痛方”对偏头痛大鼠中脑及三叉神经节病理及CB1受体、COX-2表达的影响:造模后2小时,取大鼠中脑及三叉神经节,制作病理切片,进行HE染色,光镜下观察中脑及三叉神经节组织形态学变化;采用免疫组织化学方法观察大鼠中脑和三叉神经节标本CB1受体、COX-2蛋白表达,并进行统计分析。结果1.建立硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型及行为学观察(1)注射硝酸甘油后各组大鼠均不同程度地出现前肢频繁挠头、爬笼次数增多、往返运动增多等不适表现;偏头痛模型组评分明显高于空白对照组,有极显著差异,提示硝酸甘油型实验性偏头痛大鼠模型造模成功。(2)“和解止痛方”及欧立停各治疗组大鼠行为学改变与偏头痛模型组相比明显减轻,有极显著差异,说明“和解止痛方”各剂量组均能够减轻大鼠偏头痛症状,疗效与欧立停相当。“和解止痛方”低剂量组与空白对照组相比较,有显著差异,提示“和解止痛方”高、中剂量在改善实验大鼠行为学症状方面效果更优。2.“和解止痛方”对偏头痛大鼠血浆中CGRP、5-HT、β-EP、SP、CCK的影响(1)偏头痛模型组大鼠血浆中CGRP含量明显高于空白对照组,“和解止痛方”高、中、低剂量组血浆中CGRP含量明显降低,与偏头痛模型组比较有显著差异;(2)偏头痛模型组大鼠血浆中5-HT含量明显低于空白对照组,“和解止痛方”高剂量组血浆中5-HT含量明显升高,与偏头痛模型组比较有显著差异;(3)偏头痛模型组大鼠血浆中β-EP含量明显低于空白对照组,“和解止痛方”高、中、低剂量组血浆中β-EP含量与偏头痛模型组比较无显著差异;(4)偏头痛模型组大鼠血浆中SP含量明显高于空白对照组,“和解止痛方”高、中、低剂量组大鼠血浆中SP含量与偏头痛模型组比较无显著差异。(5)偏头痛模型大鼠血浆中CCK含量各组之间均无显著差异。3.“和解止痛方”对实验性偏头痛大鼠中脑及三叉神经节CGRP、SP、CCK mRNA表达的影响(1)偏头痛模型组大鼠中脑CGRP mRNA表达明显高于空白对照组,有极显著差异;“和解止痛方”高、中、低剂量治疗组与偏头痛模型组相比明显降低,有极显著差异。(2)偏头痛模型组大鼠中脑SP mRNA表达比空白对照组明显升高,有极显著差异;“和解止痛方”高、中、低剂量治疗组与偏头痛模型组相比明显降低,有极显著差异。(3)偏头痛模型组大鼠中脑CCK mRNA表达比空白对照组明显增高,有极显著差异;“和解止痛方”高、中、低剂量治疗组与偏头痛模型组相比明显降低,有极显著差异。(4)偏头痛模型组大鼠三叉神经节CGRP mRNA表达明显高于空白对照组,有显著差异;“和解止痛方”高、中、低剂量治疗组与偏头痛模型组相比明显降低,有显著差异。(5)偏头痛模型组大鼠三叉神经节CCK mRNA表达比空白对照组明显升高,有显著差异;“和解止痛方”高剂量治疗组比偏头痛模型组明显降低,有极显著差异,低剂量组比偏头痛模型组明显降低,有显著差异,中剂量治疗组虽然与偏头痛模型组相比无显著差异,但是在均数上比偏头痛模型组有下降趋势。4.“和解止痛方”对实验性偏头痛大鼠中脑及三叉神经节病理及CB1受体、COX-2蛋白表达的影响(1)光镜下观察偏头痛模型组大鼠中脑及三叉神经节组织HE染色:偏头痛模型组大鼠中脑神经细胞、三叉神经节细胞及神经纤维等组织形态学未见明显异常,与空白对照组相比无明显改变,“和解止痛方”高、中、低剂量治疗组与偏头痛模型组相比未见明显改变。(2)免疫组化法检测实验性偏头痛大鼠中脑及三叉神经节CB1受体表达,光镜下观察:偏头痛模型组与空白对照组相比无明显差异;“和解止痛方”高、中、低剂量组与空白对照组、偏头痛模型组相比均明显增强,有极显著差异。(3)免疫组化法检测实验性偏头痛大鼠中脑及三叉神经节COX-2表达,光镜下观察:偏头痛模型组比空白对照组明显增强,有极显著差异;“和解止痛方”高、中、低剂量组比偏头痛模型组明显降低,有极显著差异;高、中剂量组与低剂量组相比明显降低,有极显著差异。结论1.“和解止痛方”能够有效改善硝酸甘油型偏头痛实验大鼠的行为学症状,与欧立停作用无显著差异,高、中剂量效果更优。2.“和解止痛方”高、中、低剂量均能够降低大鼠血浆中CGRP含量、高剂量能够升高大鼠血浆中5-HT含量,从而改善偏头痛症状。3.“和解止痛方”可以通过下调大鼠中脑CGRP、SP、CCK mRNA表达,影响内源性痛觉调制系统的功能从而改善偏头痛症状。4.“和解止痛方”可以通过下调大鼠三叉神经节CGRP、CCK mRNA表达来改善偏头痛症状。5.“和解止痛方”可以激活大鼠中脑及三叉神经节CB1受体表达、减少COX-2蛋白表达,从而减轻神经源性炎症反应,来发挥治疗偏头痛的作用。