荷叶为睡莲科植物莲（Nelumbo nucifera Gaertn.）的干燥叶片，我国南北方均有栽培。古代医学文献记载荷叶具有清暑利湿、生发清阳、止血等功效。荷叶中含有丰富的生物碱类、黄酮类、有机酸类及鞣质类等物质，现代研究发现生物碱是荷叶中的主要有效成分，具有显著的降脂活性。本文以荷叶中荷叶碱为对照品，采用正交设计法考察荷叶生物碱的最佳提取方法，在此基础上，研究以荷叶碱为对照品的薄层鉴别方法，并采用反相高效液相色谱法测定荷叶中荷叶碱的含量，为研究荷叶生物碱的药理学活性提供原料及参考依据。目的：考察荷叶生物碱的最佳提取方法及条件；建立反相高效液相色谱法测定荷叶中荷叶碱含量的方法；探讨以荷叶碱为对照品鉴别荷叶药材的薄层色谱法。方法：（1）鉴别：照薄层色谱法（中国药典 附录VI B）吸取样品溶液及对照品溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-氯仿-二乙胺（7：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254nm）下检视。（2）总碱的提取及含量测定：以荷叶中所含荷叶碱为对照品，紫外分光光度法考察荷叶总生物碱的最佳提取方法并以正交试验法优选最佳提取条件。（3）荷叶碱的含量测定：①样品的制备：以<WP=5>不同溶剂，超声振荡提取荷叶碱。②色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、流速，使荷叶色谱峰的分离符合测定要求。③标准曲线的绘制：配制一系列浓度的荷叶碱对照品溶液，测定峰面积。以荷叶碱含量为横坐标，相应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。④最低检测限的确定：将荷叶对照品溶液逐步稀释，当信噪比S/N≥3时确定为最低检测限。⑤稳定性试验：取同一份荷叶药材样品溶液，在12h内于不同时间注入液相色谱仪，分别测定峰面积。⑥精密度试验：取同一份荷叶药材样品溶液，重复进样5次，测定峰面积。⑦重复性试验：取荷叶药材，平行制备同一浓度的样品5份，分别进样，测定荷叶碱的含量。⑧回收率试验：取已知含量的荷叶药材，加入适量的荷叶碱对照品，平行制备同一浓度的样品5份，分别进样。⑨样品测定：取按样品溶液的制备项下方法制备所得样品溶液及总生物碱提取液，在上述色谱条件下，分别测定其中荷叶碱的含量。结果：（1）鉴别：照薄层色谱法（中国药典 附录VI B）进行实验，样品在与对照品相同位置有蓝色荧光斑点。（2）总生物碱的提取及含量测定：荷叶总生物碱的最佳提取方法为阳离子交换树脂法；正交试验法优选出最佳提取条件为：以20倍量0.1% HCl溶液于90℃恒温提取2h。在实验所得最佳提取条件下制备样品溶液，于272nm处测定其吸光度，由回归方程计算总生物碱含量，以荷叶碱记总生物碱含量为2.12％。（3）荷叶碱的含量测定：①样品的制备：以盐酸-甲醇为溶剂，超声波振荡提取，具有快速、简便、提取完全和稳定等优点。②色谱条件：Hypersil-C18（5μm，4.6mm×150mm）色谱柱，流动相：乙腈－水－磷酸－三乙胺（40：<WP=6>60：0.4：0.6, pH6.0）；流速为1mL·min-1；检测波长为272nm。③以荷叶碱浓度（mg·mL-1）为横坐标，峰面积（×10000）为纵坐标，线性回归得回归方程为Y=2.5486X－0.5765， r=0.9998（n＝6）。荷叶碱在0.002~0.071mg·mL-1范围内线性关系良好。④最低检测限为38ng。⑤样品在12h内稳定，其RSD值为1.3%。⑥样品的精密度良好，其RSD值为1.4%。⑦样品的重复性较好，RSD值为2.4%。⑧样品回收率为100.1%，RSD为0.60%。⑨依据上述色谱条件进行分析，由标准曲线计算得到荷叶中荷叶碱的含量为0.06%，RSD为1.3%；总生物碱提取物中荷叶碱含量为5.12%，RSD为0.56％结论：本实验建立了荷叶生物碱的提取方法及薄层鉴别方法，以该法制备提取物所含杂质少，避免了萃取过程，有效避免了有机溶剂萃取法存在的目标成分萃取不完全、实验周期长及有机试剂的毒性等问题；所得提取物中总生物碱的测定采用以荷叶碱为对照品的紫外分光光度法，方法简便，结果准确；同时首次建立了高效液相色谱法测定荷叶及其总碱提取物中荷叶碱的含量，以测定结果为依据，考察最佳提取方法及条件。该法专属性强、操作简便、结果准确、精密度和稳定性良好，为深入研究其药理学活性提供借鉴。