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鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是由冠状病毒科、冠状病毒属的鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病。上世纪30年代在美国爆发以来,现在已经成为世界各地流行的主要禽病。IBV是单股RNA病毒,该病毒基因可由于点突变和重组而发生变异,因此IBV的血清型较多,已达30余种之多,常见的有M41、Conn、Iowa97、Gray、Hotle、JMK、Clark333、SE17、Florida、Arkanass99和Australian T等,不同血清型毒株之间仅有部分或无交叉保护作用,从而给本病的防治带来困难。我国目前虽然已广泛使用IB疫苗,但由于IBV的易变异型,IB仍然呈高度流行趋势,尤其是在已免疫鸡群中也常常爆发IB,造成严重的经济损失。近年来,河南各地养鸡场在进行了IB的常规免疫程序后,仍爆发了严重的疑似IB的传染性疾病,给全省的养鸡业造成严重的损失。为查明引发该类疾病的确切病因,找出确切的病原,我们对河南某发病鸡场疑似IB的典型病例展开了病原的实验室分离和鉴定工作,并对其生物学特性进行了研究。无菌采集发病鸡的气管、肺脏、肾脏等组织,采用鸡胚盲传观察病毒对鸡胚的致病作用,病毒盲传至第2代后鸡胚出现死亡和侏儒胚;尿囊液经磷酸酯酶C处理后能够凝集1%的鸡红细胞;病毒纯化后经外源病毒检测,无外源病毒污染;将病毒盲传至E8代时,病毒的EID50逐渐增强到106.5/0.1 mL;病毒能够干扰NDV在鸡胚中的增殖;病毒可致SPF雏鸡发病,引起肾脏肿大、花斑肾、尿酸盐沉积等肾脏病变;电镜下可见到直径90～105 nm的冠状病毒粒子;理化特性测定表明,该毒株对乙醚和氯仿敏感,耐酸不耐碱,对热敏感。初步证实分离的病毒为鸡传染性支气管炎病毒,命名为HN99株。对HN99株的Sl基因进行克隆与测序,使用DNAStar软件进行序列分析。结果显示,HN99株与常见的M41、Gray、Holte、H120、H52、Conn等毒株的Sl基因同源性不高,分别为79.4%、72.7%、77.4%、79.1%、78.3%,而与T株的同源性高达99.6%,遗传进化关系也揭示HN99株与T株的亲缘关系较近,而与其它毒株的关系较远。证实HN99株为一新的IBV变异株。利用病毒中和试验和HI试验对HN99株进行了血清分型,结果表明HN99株不属于常见的M41、Conn、Gray等血清型,而HB、JS、SD等地方分离株则属于HN99株血清型,表明HN99株血清型具有一定的地域覆盖性;交叉保护试验证实了血清分型的结果;用HN99株和M41株制备的二价疫苗免疫试验鸡后,不仅产生了较高的抗体水平,而且能够同时抵御HN99株血清型和M41株血清型毒株的攻击,表明HN99株有较好的免疫原性,为利用地方分离株进行IB的防制奠定了基础。