禽腺病毒4型分离鉴定及其灭活疫苗免疫效果评价

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自2015年开始,我国河北、山东、江苏等地家禽陆续发生血清4型禽腺病毒(FAV-4)病,随该病的流行,目前全国各地均有发生。由于本病缺乏疫苗防控和有效治疗药物,导致流行速度快、范围广,死亡率高,给养殖业带来巨大损失。感染FAV-4死亡家禽临诊剖检明显可见心包内有大量淡黄色液体,肝脏肿大、坏死,实验室可以从病死鸡的肝脏内检测到禽腺病毒。该病毒即可水平传播,也可通过鸡胚垂直传播,所以给防控带来了极大困难。本研究从湖南省永州市祁阳县疑似心包积液-肝炎综合征病死鸡的肝组织病料中,经接种鸡肝癌(LMH)传代细胞分离培养得到1株病毒。试验对分离毒进行了PCR检测、血清分型、动物回归试验、病毒含量测定、特异性鉴定、免疫原性试验和理化特性检查等一系列研究。结果表明,分离毒经PCR扩增出大小为2000bp的核酸片段与预期扩增片段大小相符;经序列分析,该核苷酸序列与Gen Bank中登录的禽腺病毒4型(FAV-4)毒株的核苷酸序列同源性为94.4%;分离株病毒液可被Ⅰ群4型FAV特异性抗血清中和;病毒含量为107.34TCID50/0.1ml;病毒液可致21、42和56日龄SPF鸡90%~100%发病,病理剖检发病鸡呈现心包积液-肝炎综合征的典型病理变化。将分离并鉴定为禽腺病毒的病毒液稀释成107.0 TCID50/0.1ml、106.0TCID50/0.1ml和105.0TCID50/0.1ml 3个滴度。用终浓度为1‰甲醛灭活,并乳化制成油乳剂灭活疫苗,经对该疫苗成品的安全性检验,表明该分离株灭活疫苗的安全性良好。经一系列动物试验,包括对分离株灭活疫苗的免疫原性研究、免疫持续期试验等。免疫鸡群抗体琼扩效价最高为1:2,免疫原性良好。不同日龄SPF鸡单次免疫后保护期为2-4个月。试验证明,该分离毒为Ⅰ群禽腺病毒,将其命名为HN株,可作为优质疫苗候选毒株。
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