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目的:研究慢性应激对脑内血管周隙水孔蛋白4(AQP4)介导的胶质淋巴系统的影响及其分子机制。方法:1、应激及给药:采用慢性温和不可预知应激(CUMS)模型,小鼠应激6周,通过测定体重变化、血浆皮质酮浓度、以及旷场实验、强迫游泳实验和悬尾试验进行模型评价。在实验过程中,将小鼠分为对照组(Control组)、应激组(CUMS组)、地塞米松组(DEX组)和米非司酮组(MFP组)。其中DEX组每天腹腔注射地塞米松5mg/kg,MFP组每天除应激外灌胃给药米非司酮35mg/kg,均给药6周。2、荧光示踪法测定胶质淋巴系统功能:采用小脑延髓池注射荧光示踪剂,在30min和90min时灌流固定,取脑进行振动切片,在荧光显微镜下观察拍照,采用Image J计算分析荧光示踪剂在脑内的分布面积,分别代表蛛网膜下腔的荧光示踪剂进入脑内及从脑内清除的情况,以此来评价脑内胶质淋巴系统的功能。3、小鼠脑内AQP4和GFAP蛋白表达水平测定:采用western blot、免疫荧光和Q-PCR测定慢性应激及给药小鼠皮层AQP4的蛋白表达和转录情况;采用Q-PCR测定小鼠皮层AQP4相关锚蛋白的转录水平;采用western blot测定皮层GFAP蛋白表达水平。结果:1、荧光示踪法测定脑内胶质淋巴系统功能方法的建立:不同分子量的荧光示踪剂经小脑延髓池注射后经过蛛网膜下腔沿软脑膜和皮层穿透动脉的血管周隙进入脑实质,并且小分子量比大分子量在脑内分布更快更广;注射后30min示踪剂在脑内达峰值,90min时大部分示踪剂从脑内清除并且聚集于颈部淋巴结;示踪剂在脑内不同部位分布不同,主要集中于侧部和腹部皮层及脑底部。2、与Control组相比,CUMS组、DEX组和CUMS+MFP组小鼠体重增加显著变缓(p<0.01),而CUMS+MFP组与CUMS组相比体重变化无显著性差异(p>0.05);与Control组相比,CUMS组小鼠血浆皮质酮浓度显著升高(p<0.05),而DEX组和CUMS+MFP组小鼠无显著性差异;行为学实验结果显示,与Control组小鼠相比,CUMS组和DEX组小鼠旷场实验中水平运动距离和中央格停留时间显著减少(p<0.05);强迫游泳和悬尾实验中静止时间显著增加(p<0.001),CUMS+MFP组小鼠与CUMS组相比水平运动距离显著增加(p<0.01),静止不动时间显著减少(p<0.001);Aβ1-40免疫染色结果显示,CUMS组皮层Aβ1-40的表达显著高于Control组(p<0.05),而CUMS+MFP组与CUMS组相比其脑内Aβ1-40表达显著降低(p<0.05)。3、与Control组相比,在三个切片部位(Bregma+2.5,+1.1,-1.5),CUMS组和DEX组小鼠OA-45和FITC-d3在注射后30min时进入脑内的量明显减少(p<0.01),且在皮层背部与侧部减少更为显著(p<0.001);而在90min时,三个切片部位,两种示踪剂在脑内的残留量均显著增加(p<0.05)。与CUMS组相比,在这三个切片部位,CUMS+MFP组小鼠在注射示踪剂30min时OA-45和FITC-d3进入脑内的量明显增加,而90min时脑内残余量明显降低(p<0.05)。4、CUMS组及DEX组小鼠皮层AQP4蛋白表达显著降低(p<0.001),转录水平显著降低(p<0.05);GFAP蛋白表达水平也显著降低(p<0.01),MFP能够显著提高大脑皮层AQP4和GFAP的表达(p<0.05);CUMS组和DEX组小鼠皮层AQP4在大小血管中均失去极性分布,且在前额叶(Bregma+2.5)和前脑片(Bregma+1.1)差异显著(p<0.05),给予MFP有助于提高AQP4的极性分布(p<0.01);Agrin(聚集蛋白)和Laminin(层黏连蛋白)在CUMS和DEX组小鼠皮层m RNA水平显著降低(p<0.05),而给予MFP能提高CUMS脑内两者的m RNA水平(p<0.01)。结论:慢性应激导致皮层AQP4表达降低和分布异常从而损害了脑内胶质淋巴系统功能,其机制和糖皮质激素受体的激活有关。