【摘 要】
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研究目的 线粒体(mitochondria)是高等动物细胞内除细胞核外唯一含有DNA的细胞器,且能不依赖核基因组进行复制、转录和翻译,是进行氧化磷酸化反应(oxidative phosphorylation
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研究目的 线粒体(mitochondria)是高等动物细胞内除细胞核外唯一含有DNA的细胞器,且能不依赖核基因组进行复制、转录和翻译,是进行氧化磷酸化反应(oxidative phosphorylation OXPHOS)并为细胞提供能量的主要场所。而D环区(D-LOOP区)是线粒体DNA(mtDNA)的主要非编码区,占全部mtDNA的6%左右,位置在16028bp～577bp(tRNApro和tRNAphe之间),富含A—T碱基,遗传上是高变区,mtDNA的重链和轻链复制起始点均位于此区内,主要是调控mtDNA的转录和复制,研究表明D-环的突变速率约为整个序列的10倍。D环区具有高度多态性,这种高度多态性反映了线粒体的高度突变性,已经有大量的研究工作证实,该区是mtDNA突变的热点区域。近年来,对于人类mtDNA的突变研究成为医学界尤其是肿瘤的发生发展的研究热点,但对于急性白血病患者mtDNA D-LOOP区的突变情况尚未见有报道。本研究的主要目的是,利用PCR技术及T载体克隆技术提取并扩增急性白血病患者骨髓单个核细胞中mtDNA D-LOOP区片段全长,用直接测序法测定急性白血病患者mtDNA D-LOOP区DNA序列,探索其有无突变及突变类型。并总结急性白血病患者D-LOOP区的突变规律,探讨其发生的可能机制及后果,为急性白血病的发病机制、诊断及治疗提供分子生物学方面的理论参考。研究方法 选择20例急性白血病患者的经EDTA抗凝的骨髓液,首先以淋巴细胞分离液用差速离心法分离骨髓单个核细胞,用酚-氯仿抽提法提取基因组DNA,设计用于扩增线粒体DNA D-LOOP区全长的引物,上游引物为:
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