南瓜抗坏血酸氧化酶的提取纯化及其在甜橙原汁脱氧贮藏中的应用研究

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本文研究了南瓜抗坏血酸氧化酶(AAO)的提取纯化及其在甜橙原汁脱氧贮藏中的应用。重点研究了酶的提取、纯化、鉴定和部分性质,甜橙原汁的酶法脱氧,脱氧橙汁的贮藏试验,以及不同纯化程度的AAO对橙汁脱氧贮藏的影响。研究结果表明: 1.南瓜AAO的纯化采用了40-80%硫酸铵分段盐析,丙酮沉淀,DEAE-Cellulose层析和Sephadex G-150层析等步骤。经聚丙烯酰胺凝胶电泳及AAO活性染色确定出纯化后的酶已达电泳纯,相对迁移率为0.17,与AAO酶标样对照鉴定出纯化的酶确为抗坏血酸氧化酶。纯化后南瓜AAO比活力为1791.52U/mg蛋白,酶纯度提高到173.09倍,AAO总活力回收率为42.83%。 2.研究发现,南瓜AAO热稳定性较差,60℃热处理20min可完全钝化其酶活性;孔径为0.45μm的微孔滤膜可有效地滤除酶液中的微生物,而不影响AAO酶活力;0-1.0‰范围内防腐剂苯甲酸钠对AAO酶活力无明显影响。 3.本文将瓶装甜橙原汁的加酶和杀菌工艺设计为:250ml皇冠盖饮料玻瓶中添加L-抗坏血酸30.82mg、苯甲酸钠0.112g和AAO酶液2U,注入果汁至满不留项隙,封盖后25℃静置脱氧2小时,再进行70℃、30min杀菌处理。 4.甜橙原汁贮藏试验结果表明,脱氧贮藏有利于橙汁中L-抗坏血酸的保存,4℃和25℃贮藏360天后L-抗坏血酸保存率较对照提高22.21%和31.10%。脱氧贮藏可明显延缓橙汁褐变的发生并减轻褐变的程度,4℃和25℃贮藏时分别推迟25天和30天发生褐变;360天后420nm吸光度的增加量分别仅为对照的36.90%和56.92%。按2U/瓶的量加入AAO对橙汁的感官品质无明显影响,贮藏后还可明显改善脱氧橙汁的色泽和风味。脱氧贮藏对橙汁混浊度、可溶性固形物、可滴定酸、固酸比和菌落总数的变化均无明显影响。 5.按2U/瓶的量在甜橙原汁中加入不同纯化程度的AAO酶液均对橙汁的感官品质无明显影响,并且低纯度酶液在脱氧反应后期脱氧速率还略高于高纯度酶,因此在生产中应用成本更低的粗酶液或低纯酶是完全可行的。
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