犬乳腺肿瘤是犬肿瘤疾病的常发病,约占据肿瘤性疾病的一半,而恶性犬乳腺肿瘤又占大约50%。目前关于犬乳腺肿瘤的发生发展机制尚不清楚,临床诊断和治疗缺乏科学的指导依据。为了研究circ MTHFD2L在犬乳腺肿瘤发生发展中的作用,本实验对circ MTHFD2L在犬乳腺肿瘤中是否存在微小RNA（mi RNA）海绵机制进行了探究。以实验室保存的原发型犬乳腺肿瘤细胞CHMP作为实验材料,利用RNA结合蛋白免疫沉淀（RNA binding protein immunoprecipitation,RIP）实验,将与Ago2蛋白（argonaute2,Ago2）结合的mi RNAs、circ RNAs一并下拉,发现circ MTHFD2L能与Ago2蛋白结合,且与阴性探针相比具有差异显著性,具有Ago2介导的mi RNA海绵的基础。为了验证和检测其作为mi RNA海绵所吸附的mi RNAs,利用RNA下拉（RNA pull down）实验,以circ MTHFD2L为抗原沉淀与之结合的mi RNA和蛋白,共得到101种差异性表达的mi RNA和44种差异表达的蛋白质。同时,利用circ MTHFD2L序列信息,通过生物信息网站（Target Scan Human7.2）预测与之结合的mi RNAs,再结合从RNA pull down中检测到的101种差异表达的mi RNAs,共筛选出2个与乳腺肿瘤发生发展相关的mi RNA,分别是cfa-mi R-34a、cfa-mi R-449a。为了进一步验证circ MTHFD2L作为海绵吸附cfa-mi R-34a、cfa-mi R-449a,设计了双荧光素酶报告基因实验,结果显示cfa-mi R-34a、cfa-mi R-449a与circ MTHFD2L结合率不高,表明circ MTHFD2L不是吸附cfa-mi R-34a、cfa-mi R-449a的海绵。另一方面,前期验证结果表明,circ MTHFD2L在犬乳腺肿瘤组织中显著性差异低表达,猜测其可能在乳腺肿瘤中发挥抑癌作用,且根据生物信息预测,circ MTHFD2L可能参与细胞凋亡机制。在CHMP中对circ MTHFD2L进行过表达,利用荧光定量PCR方法检测Bcl-2、Bax和p53三个凋亡相关基因表达量。结果显示circ MTHFD2L过表达对细胞凋亡没有明显作用,凋亡因子表达量无明显变化,表明circ MTHFD2L对细胞的凋亡作用不显著,可能通过其他方式发挥作用。综上所述,本文初步探寻了circ MTHFD2L在犬乳腺肿瘤中的mi RNA海绵机制和circ MTHFD2L过表达对凋亡的作用,为后续研究circ MTHFD2L对犬乳腺肿瘤的发生发展提供了数据支撑。