降解草酸益生菌的筛选及其对实验动物的功效研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:yuanshidemeng36
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目的:1.从传统发酵食品中筛选多株具有降解草酸能力的乳酸菌株,并通过其它的功能评价,筛选出一株最佳乳酸菌菌株。2.对筛选出的最佳乳酸菌菌株进行初步安全性评价。3.观察筛选出的菌株对肾结石模型大鼠影响。方法:1.目的菌株的初筛,其它功能评价将传统发酵食品中筛选出的乳酸菌接种在添加10%的草酸的液体MRS培养基中,培养48h,检测发酵液中草酸的剩余含量。选出六到八株降解草酸率最高的菌株作为候选菌株进行进一步研究。候选菌株其它功能评价包括耐酸、耐胆碱实验,候选菌株发酵液对致病菌的抑制实验,耐肠道酶(胰蛋白酶、胃蛋白酶)实验,对细胞HT-29(人结肠癌细胞)的粘附实验及抗生素敏感实验,根据以上实验结果选择出最佳菌株。2.目的菌株的初步安全性评价目的菌株的初步安全性评价实验包括:急性毒性实验,细菌易位实验以及质粒的检测。3.目的菌株对大鼠肾结石模型的干预将wistar大鼠随机分四组:正常对照组(对照组),草酸钙结石模型组(模型组),乳酸菌低剂量干预组(低剂量组),乳酸菌高剂量干预组(高剂量组)。构建大鼠肾结石模型的同时灌胃目的菌株的牛奶发酵乳,实验第29天,测量各组大鼠的体重,收集24h尿液测尿液中钙离子,草酸,柠檬酸的含量。取大鼠左肾制作石蜡切片,观察各个实验组结石发生情况。4.菌种鉴定对筛选出的菌株进行菌种鉴定,确定种属性。结果:1.从传统发酵食品中共筛选出344株乳酸菌,选择其中降解草酸率最高的菌株作为候选菌株:DM8320、DM9207、DM9176、DM9147、DM9162、DM9172。以上六株菌的其它功能性筛选结果表明,DM9207、DM9147、DM9172不同胆盐浓度条件下的存活率较均低,DM9162在不同pH下增殖倍数较低,且其发酵上清液的抑菌效果较差,DM9176对多种抗生素具有耐药性,基于以上原因,选择DM8320为最佳菌株,进行后续实验。2.初步安全性评价实验中,菌株DM8320中未发现含有质粒;血液、肝、脾组织匀浆液中不含有该菌;在毒力实验中,小鼠活动正常,无毒性反应或死亡现象发生。3.目的菌株对大鼠肾结石模型的干预实验中,除模型组外,对照组、高剂量组、低剂量组体重变化呈上升趋势。第29天各组大鼠体重结果显示,结石模型组与对照组、高剂量组、低剂量组相比体重较低(p<0.05);高剂量组、低剂量组的钙离子,草酸根离子含量与结石组相比较低(p<0.05),高剂量组、低剂量组的柠檬酸含量与结石组相比较高(p<0.05)。各组大鼠肾脏石蜡切片个观察到结石组,低剂量组及高剂量组肾皮质中含有不同程度肾结石结晶。结石组中结石含量最多,低剂量组次之,高剂量组肾结石结晶含量较少。4.菌种鉴定经鉴定,DM8320为路氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。结论:1.传统发酵食品筛选出的344株乳酸菌中,菌株DM8320具有高效体外降解草酸的能力和良好的其他生物功能。菌株DM8320为路氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)。2.菌株DM8320不具有急毒性,正常情况下不会发生细菌易位现象,不含有质粒。3.菌株DM8320对wistar大鼠肾结石的形成具有一定的抑制作用。
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