蓝莓叶多酚单体抗高血压作用机理研究

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以南京兔眼蓝莓叶为原料,采用大孔树脂提取纯化蓝莓叶多酚,通过高效液相色谱串联质谱对蓝莓叶多酚成分进行初步鉴定,并确定其主要单体成分:绿原酸、低聚原花青素和槲皮素衍生物金丝桃苷。蓝莓叶多酚单体成分抗高血压作用机理的研究,体外培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVEC),通过肿瘤坏死因子-α (Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)干预细胞建立内皮细胞功能损伤模型,观察不同浓度槲皮素及衍生物金丝桃苷和绿原酸对内皮细胞的保护作用。采用MTT方法检测不同浓度蓝莓叶多酚单体对细胞活力的影响,结果表明:槲皮素、金丝桃苷和绿原酸对TNF-α诱导的内皮细胞起到不同程度的保护作用。采用ELISA方法检测不同浓度蓝莓叶多酚单体处理的细胞上清液中血管紧张素I转化酶(Angiotensin I Converting Enzyme, ACE)的表达情况来探讨它们的舒血管作用。结果表明:槲皮素、金丝桃苷和绿原酸对TNF-α诱导的内皮细胞上清液中ACE具有一定的抑制作用,且槲皮素和绿原酸作用效果显著。这表明蓝莓叶多酚单体具有一定的舒血管功能。采用ELISA方法检测不同浓度蓝莓叶多酚单体预处理细胞后上清液中血红素氧化酶-1 (Heme oxygenase-1, HO-1)和黄嘌呤氧化酶-1 (Xanthine oxidase-1, XO-1)水平,荧光免疫法检测活性氧(Reactive oxygen species, ROS), WST-8法检测细胞中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD),探讨它们的抗氧化作用。结果表明:TNF-α促进血管内皮细胞上清液中的XO-1的表达并提高ROS水平和抑制HO-1与SOD。槲皮素、金丝桃苷和绿原酸能够显著抑制TNF-a诱导内皮细胞XO-1和ROS的过度表达,提高HO-1和SOD。蓝莓叶多酚单体在内皮细胞中起到抗氧化作用。采用ELISA方法检测不同浓度蓝莓叶多酚单体预处理的细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1 (Monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)、细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)和血管细胞间粘附分子-1 (Vascular cell adhesion molecule-1, VCAM-1)水平,采用Western Blot方法检测细胞内ICAM-1及VCAM-1蛋白水平,探讨它们的抗炎作用。结果表明:TNF-α促进血管内皮细胞中MCP-1、CAM-1和VCAM-1的表达,槲皮素、金丝桃苷和绿原酸能够抑制由TNF-α诱导内皮细胞中MCP-1、ICAM-1和VCAM-1过度表达,降低细胞炎症反应,进而防止血管内皮细胞受到损害。本论文从舒血管、抗氧化、抗炎三方面证明蓝莓叶多酚可以抗高血压疾病,为防治心血管疾病提供一定的依据,为蓝莓副产物的开发利用提供了理论依据。
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