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目的:本研究以推拿手法对建立的SPF级SD雌性大鼠膝骨关节炎模型进行分组治疗,并对治疗后的血液、膝关节软骨的各项指标进行检测:①用ELISA法检测的血清IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;②对膝关节软骨行Mankin评分;③用荧光定量PCR和 Western blot 法检测关节软骨中 TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB p65 mRNA 及蛋白的表达水平,通过对检测结果进行统计学分析,来探讨推拿手法治疗大鼠膝骨关节炎的机制,为临床推拿治疗膝骨关节炎提供充实可靠的动物实验依据。方法:遵循随机化的原则,运用随机数字表,抽取10只大鼠为空白组,余下40只大鼠采用木瓜蛋白酶关节注射法建立大鼠膝骨关节炎模型,待造模成功后,再将造模大鼠随机分为模型组、推拿组、灌胃组、推拿加灌胃组,每组10只。空白组、模型组常规饲养,推拿组行一指禅手法治疗,灌胃组用塞来昔布溶液灌胃,推拿加灌胃组同时予以上两种治疗。治疗4周后取材,对大鼠血清用ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平,对大鼠膝关节软骨行Mankin评分、荧光定量PCR、以及用Western blot法检测软骨TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平。采用SPSS19.0软件统计与处理数据。结果:①血清ELISA法检测结果显示,各治疗组与空白组相比血清IL-lβ、IL-6、TNF-α的表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比血清IL-1β、IL-6、TNF-α的表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);且各治疗组血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达:推拿加灌胃组<推拿组<灌胃组,差异具有统计学意义(P<0.05)。②膝关节软骨Mankin评分显示,各治疗组均比空白组均评分较高,差异具有统计学意义(P<0.05);比模型组均评分低,差异具有统计学意义(P<0.05);且各治疗组软骨Mankin评分:推拿加灌胃组<推拿组<灌胃组,差异具有统计学意义(P<0.05)。③软骨荧光定量PCR检测TLR4 mRNA、MYD88 mRNA、NF-κB p65 mRNA结果显示,推拿组、灌胃组比空白组表达上调(P<0.05),推拿加灌胃组与空白组相比表达几乎无差异(P>0.05);与模型组相比,各治疗组表达下调(P<0.05);TRAF6 mRNA结果显示,各治疗组均比空白组的表达上调(P<0.05),比模型组表达下调(P<0.05);且治疗组间的表达量:推拿加灌胃组<推拿组<灌胃组,差异具有统计学意义(P<0.05)。④Western blot 法检测软骨 TLR4、MYD88、NF-κB p65 及 TRAF6 蛋白结果显示,各治疗组比空白组的表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05);比模型组的表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);且各治疗组间的表达:推拿加灌胃组<推拿组<灌胃组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:根据实验结果可以看出,推拿疗法能够下调TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达,并通过TLR4/MyD88信号转导通路的信号传导,阻碍其产生级联炎症反应,进而抑制其下游致炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,起到消炎止痛和修复关节软骨的作用,最终达到防治膝骨关节炎的目的。这为用推拿疗法对TLR4/MyD88信号转导通路的影响来防治膝骨关节炎的作用机制的研究提供一定的动物实验基础。