文殊兰弱碱性生物碱的化学研究

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肿瘤一直是严重威胁人类健康的疾病之一,而传统的化疗不但毒性大、选择性差而且具有多重耐药性。因此,天然植物中提取可以抑制肿瘤细胞活性的化合物对医疗领域有着重要意义。文殊兰中的生物碱为异喹啉生物碱,具有显著的抗肿瘤活性,故近年来引起了广泛的关注。石蒜科植物常被用于治疗祛痰、解毒、水肿、咽喉肿痛以及痈疮恶核,同时具有利尿的作用。近年来,研究发现,石蒜科植物对中枢神经系统产生作用、抵抗多种病菌作用、能够对心血管系统产生影响并且具备抗病毒的功效,同时对肿瘤细胞有明显的抑制作用。石蒜科文殊兰被广泛应用与治疗抗炎镇痛等疾病治疗中。民间常用于清热解毒、消肿散瘀。目前,国外关于文殊兰的系统而全面的研究还较少,因此有必要对文殊兰中生物碱进行综合分析,进而获得文殊兰中的弱碱性生物碱。并对其进行化学研究,为文殊兰生物碱的临床使用提供有力的实验依据的同时为临床用药提供有效的参考数据,为研发出高效低毒的中药新药奠定科学的理论基础。并通过质谱分析等手段,建立标准化的定性研究的方法。同时,该研究对于其他生物碱的提取、分析以及鉴定也具有一定的参考意义,为研发出高效低毒的中药新药奠定科学的理论基础。本实验采用醇提碱沉的经典化学方法,对文殊兰种子中生物碱进行提取。并利用正交法进行对文殊兰中总生物碱提取工艺的优化。利用生物碱的碱性差异,以盐酸溶解生物碱使其成盐,加氨水依次递增pH值,乙酸乙酯萃取,分离出弱碱性生物碱。通过薄层色谱对文殊兰弱碱性生物碱进行展开分离,固定相为硅胶,展开剂为乙酸乙酯-甲醇,利用碘化铋钾显色,得两个斑点,为柱层析筛选条件提供参考。利用柱色谱法对文殊兰弱碱性生物碱分离提纯,固定相为硅胶,流动向为甲醇-乙酸乙酯梯度洗脱。利用HPLC对所得两种样品进行分析。并利用液质联用对文殊兰弱碱性生物碱两份样品进行定性分析,以进一步分析推测其分子量。通过上述方法确定文殊兰总生物碱的最佳提取工艺为乙醇浓度85%,提取温度为65℃,提取3h。利用pH=4的盐酸溶解总生物碱后,过滤,乙酸乙酯萃取3次至没有生物碱反应,合并萃取液,得文殊兰弱碱性生物碱。通过薄层法筛选固定相为硅胶,展开剂为乙酸乙酯:甲醇=3:14。展开后得Rf分别为0.333和0.712。在柱层析实验中,乙酸乙酯:甲醇=100:1至乙酸乙酯:甲醇=10:6所收集的组分样品,利用薄层展开为Rf=0.712,合并后减压蒸发,所得样品为即为1号样品。在乙酸乙酯:甲醇=10:9至乙酸乙酯:甲醇=1:1所收集的组分,经薄层展开Rf=0.333。合并后减压蒸发,所得样品为即为2号样品。对所得两组分样品利用HPLC进行分析,通过对流动相筛选,最终选择甲醇-水梯度洗脱,其中甲醇比例为10%-100%,水比例为90%-0%,洗脱时间为1h。利用LC-MS对两份样品进一步分析,利用所得分子量推测可能得到的文殊兰弱碱性生物碱为 Latifoliumprine,Latifoliumdne,Lyeorenan-7-one,LatifoliuminB,Uridine(尿嘧啶核苷),Ungeremine(恩其名),Lycorenium A,1-methyl-1 H-pyrimidi ne-2,4-dione,NareiPrimin,Arolyeorieidin,八种生物碱。
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