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东北虎源细小病毒是由猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleucopenia virus,FPV)引起的一种急性和致死性极高的传染病。又称猫泛白细胞减少症、猫瘟热病毒、猫细小病毒、猫传染性肠炎病毒。在自然条件下,可感染熊、虎、水貂、豹等多种食肉类动物,该病发病过程急、患病过程短、传染性和死亡率较高。FPV的爆发在很大程度上对特种经济动物以及野生动物造成威胁,因此控制FPV在我国的流行、诊断和预防具有重要的意义本研究以黑龙江省某虎林园的东北虎粪便为研究对象,该虎具有出血性肠炎,精神萎靡等症状。通过病毒分离鉴定、动物回归试验及分子生物学检测等方法,证明东北虎的发病原是东北虎源细小病毒,命名为FPV-HER-NEFU。细小病毒NS1蛋白在病毒的复制和转录过程中起重要作用。研究NS1基因对细小病毒的生物学特性及诊断预防等方面研究具有指导意义。本研究对分离的东北虎源细小病毒NS1全长基因进行克隆,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析和构建分子遗传进化树。成功扩增2007bp靶基因并连接到表达载体pGEX-6P-1中以构建重组表达载体pGEX-FPV-NS1。将阳性重组质粒转化到大肠杆菌感受态Rosetta(DE3)中并用IPTG诱导。获得的可溶性蛋白质为102.6kDa,具有良好的免疫原性。我们使用该重组蛋白作为诊断抗原,建立细小病毒的间接ELISA检测方法。通过方针滴定法确定最佳条件,包括250ng/孔的抗原浓度,1:100的血清稀释度和5%脱脂乳作为封闭液,二抗浓度为1:8000,底物作用时间为25分钟。实验结果表明,建立的间接ELISA方法具有较高的特异性和灵敏度。最后,采用 TdT-mediateddUTP Nick-End Labeling(Tunel)荧光染色,DNA 片段化分析,实时荧光定量,Western Blot等方法初步探究FPV对F81细胞凋亡的影响。结果表明FPV感染F81细胞后,细胞的凋亡率随着病毒感染时间的延长而逐渐升高;FPV感染F81细胞能够显著激活细胞内Caspase-9及Caspase-3,而Caspase-8,Fas和FasL的表达无显著变化,该病毒可能通过Caspase-9/-3级联活化来诱导F81细胞发生凋亡,并且FPV感染能够上调细胞内促凋亡分子Bax的表达,下调细胞内的抑凋亡分子Bcl-2的表达。综上所述,本研究成功从东北虎粪便中分离出一株细小病毒FPV-HER-NEFU毒株,通过克隆测序获得了其主要ORF序列并进行生物信息学分析;并以表达的pGEX-FPV-NS1蛋白为抗原,建立了猫科血清抗体的间接ELISA检测方法。本研究将有助于分析我国虎源细小病毒的分子流行情况和遗传规律,为筛选虎源细小病毒疫苗株及其诊断奠定基础。并初步探究FPV对F81细胞凋亡的影响,为进一步研究FPV感染对宿主细胞的致病机制提供理论依据,同时也为其它病毒的研究提供新思路。