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研究目的 造血干细胞移植在肿瘤放化疗之外开创了一个全新的治疗领域，为某些恶性血液病、遗传免疫缺陷性疾病提供了一种根治手段；该项研究也为基因治疗的开展创建了一个技术平台。随着移植技术日益完善，移植适应范围的逐渐扩大，如何降低移植并发症的发生，提高患者生存质量已成为当前该领域研究的重要内容。对异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)患者巨细胞病毒(CMV)感染的研究，可为临床开展病毒早期检测、感染预防和疗效评价提供依据，从而降低CMV相关性疾病的发生及病死率。通过对CMVgB基因分型检测，探讨不同gB基因型别的CMV感染与某些移植合并症的相关性，为临床前瞻性预防治疗提供依据，减少移植相关合并症，提高治愈率，改善患者生存质量。 研究方法 选用我院2001年4月～2003年4月接受Allo-HSCT的患者79例，其中急性髓性白血病(AML)27例；急性淋巴细胞白血病(ALL)15例；慢性髓性白血病(CML)17例；骨髓增生异常综合征10例，非霍奇金氏病4例；再生障碍性贫血6例。其中进行异基因外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)49例，包括异基因外周血CD34~+细胞移植(Allo-PBCD34+T)1例，非清髓性移植(NST)10例，父子间HLA半相合移植2例，同胞HLA不完全相合移植2例(1例5／6位点相合，1例4／6位点相合)；异基因骨髓移植(Allo-BMT)17例；异基因骨髓+外周血干细胞移植(Allo-BM+PBT)9例，脐带血移植4例。患者年龄中位数32(11-60)岁，男49例，女30例(男：女=1.63：1)。 本课题研究应用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)结合酶切分型对外周血CMV阳性标本的CMVgB基因片段进行分型检测，PCR检测引物由美国西雅图FHCRC肿瘤研究中心惠赠，我们借助于巢式PCR的高灵敏性实现病毒感染的及时检出，结合PCR扩增片段的酶切分型，一方面避免了PCR检测带来的假阳性结果，另一方面也对我中心患者所感染的CMVgB型别做出分析，探讨不同gB基因型别的CMV感染与移植后GVHD及造血重建的相关性。同时比较检测结果与国外研究结论之间的异同。此方面的研究在国内尚无相关报道。 研究内容 一、CMVgB基因的分型检测 CMV病毒gB包膜糖蛋白在病毒感染细胞过程中起重要作用。本实验采用巢式PCR(Nested-PCR)扩增该病毒基因序列中编码gB蛋白的部分基因片段。 硕士学位论文 共对79例患者的135份外周血标本及25份肠道组织标本进行检测，对其中45 份标本做酶切分型，并对不同型别标本进行了序列测定。 二、异基因造血干细胞移植后CMV感染与Glq．－－u及造血重建的相关性 造血干细胞移植后CMV感染与GVHD是影响患者生存的重要方面，对于探 讨GVHD预测指标及发病机理具有重要的临床意义。联系79例患者的临床资料， 用统计学方法对二者的相关性进行分析。并依据分型检测结果，进一步研究不同 CMVgB基因型别的病毒感染与急、慢性GVHD的发生及严重程度的相关性。 为探讨造血干细胞移植后造血重建不良是否与CMV感染有关，我们分析了 不同CMVgh型别的病毒感染与骨髓抑制的相关性。 三、肠道GVHD与肠道组织CMV病毒感染 临床发现有的肠道GVHD患者治疗反应较差，可能伴有CMV性肠炎。对 二者关系的探讨为临床治疗提供依据，因此我们对上述79例患者中曾行肠镜检 查的患者留取肠道组织标本进行CMV的PCR检测，结合同期外周血检测结果 做了一定的分析。 研究结果 对 79例患者的 135份外周血所做 PCR检测中有 42例患者（53．2％）的 66份 标本（48．9％）CMV阳性；对其中 42例患者的 45价标本进行了酶切分型：gBI型 ZI 例（46．7％），CMV gBZ型14例（31．l％），CMV gB3型7例（15．6％），Ci gB4型3 例（6．7％）。移植后不同时期先后有两种型别的CW病毒感染者有3例（3．8％）。结 合临床资料探讨不同基因型别的CMV感染与临床GVHD及移植后造血重建的相关 性。结果发现，检测 CWsB（＋）组和 CMVsB卜）组的 GVHD发生率分别为 80．9％（34／42 例）VS．32．4％（1／37例）（P＜0．01）；在 CMV检测阳性组中＊—IV度急性 GVHD／ 慢性 GVHD的发生率在 CMV二～：B4型分别为：81．0％，50．0％，42．9％和 0。提 示CMVgBI、gBZ型中重度aGVHD和慢性GVHD发生率高。回顾性地分析造血抑制 患者CMV感染情况似乎提示二者有某些相关性，统计学分析无显著意义可能与 样本数过少有关，尚需进一步研究。我中心分离检测的 CMV gBI型和 gB3型的基 因测序结果与GeneBank的标准序列有确定的差异。 研究结论 移植后CMV感染的Nested－PCR检测与传统的CMVpp65检测方法在敏感性 和特异性方面具?