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多数病原微生物进入机体是通过黏膜表面,针对该类病原体发展黏膜免疫疫苗或治疗药物,对于预防或治疗疾病非常理想。乳酸菌（lactic acid bacteria, LAB）是一类食品级安全GRAS （Generally Recognized As Safe）微生物,也是人体肠道中的益生菌,对人类健康和营养有益处。乳酸杆菌是健康妇女阴道内的正常菌群,能自洁阴道微生态环境,制约其它致病菌定植生长,也是阴道内的益生菌。以乳酸菌为黏膜免疫或治疗药物的递送载体,使抗原或治疗药物直接作用于黏膜表面,是疫苗或某些蛋白类药物的发展趋势。本研究构建乳杆菌与乳球菌表达系统,拟用于阴道黏膜的重组微生态制剂或消化道黏膜的疫苗递送载体。1、构建表达干扰素ω的重组乳杆菌。构建以乳链菌肽Nisin为诱导物的NICE植物乳杆菌诱导表达系统（nisin-controlled expression, NICE）。Nisin是34个氨基酸的抗菌肽,其合成受到nisK（蛋白激酶）和nisR（调节蛋白）的双组分调节控制。本研究从乳球菌Lactococcus lactis 1.2030基因组DNA中克隆到nisA启动子,nisR、nisK基因,构建了带大肠杆菌复制子Ori和植物乳杆菌复制子p256、红霉素抗性标记的穿梭质粒pNIS300。将干扰素ω基因置于PnisA启动子下游,构建了pNIS300-ω表达质粒。经诱导表达后,发现蛋白在植物乳杆菌中的表达量微弱。随即采用类似于NICE系统的另一抗菌肽诱导表达系统,即以细菌素SapIP为诱导物,sapK和sapR为调节基因的表达质粒pSIP300。将干扰素ω基因置于PsapA启动子下游,组成干扰素表达质粒pSIP300-ω,在大肠杆菌DH5α中进行扩增,提取质粒后,分别电转化植物乳杆菌：Lacbacillus plantarum 1.3, Lacbacillus plantarum 1.11, Lacbacillus plantarum 14917。用Bender MedsystemsTM human IFN-ωELISA BMS233TEN试剂盒检测,重组菌Lacbacillus plantarum 1.11/pSIP300-ω能够表达IFN-ω。2、构建拟用于口服或经鼻黏膜免疫的重组乳酸乳球菌Lactococcus lactis。采用酸诱导P170启动子,在乳球菌生长过程中,受到自身代谢产生的H+和生长量的影响,培养基pH值不断下降,当pH在5.0-6.5之间时,启动子具有活性,这个过程正是菌体从指数生长期过渡到平台期时,既不需要额外添加诱导物,又可将菌体生长期与外源蛋白的生产期分开。采用SP310mmut2信号肽,该信号肽来源于乳酸乳球菌本身,并在酶切割位点后加上4个氨基酸AERS,这4个氨基酸有利于外源蛋白的分泌。将去除信号肽的鼠疫杆菌LcrV抗原结构基因置于AERS 4个氨基酸后,构成重组质粒pAMJ397-V,电转化感受态乳酸乳球菌Lactococcus lactis PSM565。经重组子PCR鉴定,菌体培养,SDS-PAGE检测,Western-blot鉴定,在Lactococcus lactis PSM565/pAMJ397-V培养基上清中获得了38kD的鼠疫抗原LcrV蛋白。用DEAE阴离子柱,对该蛋白进行了初步纯化。