脑胶质细胞瘤是中枢神经系统最常见的原发肿瘤，其发生率平均约占全部颅内肿瘤的44.5%；绝大多数该类肿瘤为恶性肿瘤，常导致不良预后。即便是采用手术、化疗、放疗等综合治疗措施，患者的平均生存期往往不足1年。受体型酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase，RTK）在多种恶性肿瘤组织中显著高表达，其被认为是一类有价值的肿瘤候选生物标记分子。研究发现受体EphA2及其配体ephrinA1在许多不同种类的实体肿瘤（如前列腺癌、肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤等）发生发展中共同起复杂而重要作用，EphA2和ephrinA1的表达受肿瘤细胞种类和微环境的影响，进而诱导肿瘤细胞及相关细胞信号转导，产生相应的生物学行为，对于多种肿瘤的恶性进展具有重要的意义。目的：检测酪氨酸激酶受体EphA2及其配体ephrinA1在恶性脑胶质瘤中的表达，并探讨其与胶质瘤血管生成和预后的关系。方法：采用免疫组织化学法检测62例手术切除人脑胶质瘤组织及8例正常脑组织中EphA2、ephrinA1的表达情况,并采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。探讨EphA2、ephrinA1的表达水平与胶质瘤的微血管生成及预后可能存在的关系。1免疫组化结果判定方法：采用阳性细胞百分比结合显色强度法判读结果，阳性细胞的百分比分为以下四级计分：0分：阳性细胞数<10%；1分：10%~25%；2分：>25%~50%；3分：>50%~75%；4分：>75%。染色强度:无色0分;淡黄色1分;棕黄色2分;棕色或棕褐色3分。染色程度评价根据两者相加之和分为0~3级,0级:0~1分为阴性(-);1级:2~3分弱阳性(+);2级:4~5分为中度阳性(++);3级:6~7分为强阳性(+++);染色程度1~3级为阳性。2测定微血管密度的方法：胶质瘤组织内所有被CD105单克隆抗体染成棕黄色或棕褐色的单个细胞或细胞簇，不管有无管腔,只要与其邻近的肿瘤细胞或结缔组织等其他成分区别明显,即视为1个阳性血管计数，避开肿瘤坏死或出血区域，在低倍镜（×100）下选择新生血管最丰富的“热点”(“hot spot”)区，每例标本观察1张切片，计数高倍镜视野(×400)下5个微血管数值，计算平均值作为该例切片的MVD值。3统计学方法：根据数据采集的不同方法及统计学处理的不同要求，采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差表示，不同组间EphA2、ephrinAl表达水平比较采用x2检验，CD105标记的微血管密度(MVD)组间比较采用近似t检验，EphA2、MVD和ephrinAl之间相关性分析采用pearson相关或spearman相关，不同组间生存期比较采用单因素生存分析Kaplan—Meier方法，并经Log-rank检验;多因素预后分析采用COX模型。P＜0.05表示差异有统计学意义，P＜0.01表示差异具有显著统计学意义。结果：1EphA2、ephrinA1、CD105蛋白阳性染色主要定位于细胞浆和细胞膜,呈棕黄色或棕褐色颗粒，核不着色。胶质瘤组织内微血管内皮细胞也存在EphA2的表达。2EphA2、ephrinAl和CD105表达与患者性别、年龄及胶质瘤位置无明显相关性(P>0.05)，与胶质瘤病理分级明显相关(P<0.01)（见Table1）。其中低级别胶质瘤组织中EphA2、CD105表达显著低于高级别胶质瘤(P<0.01)，但ephrinAl的表达却显著高于高级别胶质瘤(P<0.01)（见Table1）。3免疫组化实验结果显示在62例胶质瘤中,除3例低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ)、1例间变性星形胶质细胞瘤及1例间变性少枝胶质细胞瘤未检测到EphA2表达外,其余均有不同程度的EphA2表达,阳性率为91.93%(57/62);而8例正常脑组织中EphA2蛋白表达均为阴性,二者差异显著(P <0.01)（见Table2）。随着胶质瘤恶性程度增加, EphA2蛋白染色强度和阳性细胞数均明显升高，高级别脑胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ) EphA2强阳性表达率为48%(24/50),明显高于低级别胶质瘤16.7%(2/12)的强阳性表达率,差异有显著统计学意义(P<0.01)。（见Table2）。4ephrinA1在62例胶质瘤中,30例呈阳性表达，阳性率48.39%(30/62);8例正常脑组织均呈阳性或强阳性表达，差异显著(P <0.01)，且在大多数恶性脑胶质瘤中呈低水平表达，在低级别胶质瘤和正常组织中呈较高水平表达，随着胶质瘤恶性程度增加, ephrinA1蛋白染色强度和阳性细胞数均明显降低，高级别脑胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ) ephrinA1强阳性表达率为6%(3/50),明显低于低级别胶质瘤33.3%(4/12)的强阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.01)。（见Table3）。5由单克隆抗体CD105标记的微血管密度(MVD)在脑胶质瘤组表达均值为34.26±12.61，正常脑组织中表达均值为2.75±1.28，脑胶质瘤组MVD的表达明显高于正常脑组织组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；高级别胶质瘤组（Ⅲ~Ⅳ级）表达均值为38.46±10.14，低级别（Ⅰ~Ⅱ级）胶质瘤组中表达均值为16.75±2.99，高级别胶质瘤组MVD的表达明显高于低级别胶质瘤组，差异有显著统计学意义（P<0.01）（见Table4）。6MVD在5例EphA2表达阴性的胶质瘤组织中的表达均值为17.60±6.58，在57例EphA2表达阳性的胶质瘤组织中的表达均值为35.72±11.97，经统计分析可知MVD在EphA2表达阴性和阳性的胶质瘤组织中的表达均值具有显著的差异（P<0.01）。在32例ephrinA1表达阴性的胶质瘤组织中的表达均值为39.19±10.20，在30例ephrinA1表达阳性的胶质瘤组织中的表达均值为25.80±8.93，通过统计检验可知MVD在ephrinA1表达阴性和阳性的胶质瘤组织中的表达均值具有显著的差异（P<0.01）。7随着EphA2阳性表达强度增加及ephrinA1阳性表达强度降低,肿瘤组织的CD105-MVD也逐渐增加, EphA2表达与MVD呈显著正相关(r=0.713, P <0.01)（见Table5），ephrinA1表达与MVD呈显著负相关(r=－0.772, P <0.01)（见Table6），EphA2的表达与ephrinA1的表达呈显著负相关(r=－0.912, P <0.01)（见Table7）。8在62例胶质瘤标本中，EphA2、ephrinA1均阳性28例，EphA2阳性、ephrinA1阴性29例，EphA2阴性、ephrinA1阳性2例，EphA2、ephrinA1均阴性3例。按照胶质瘤标本中EphA2、ephrinA1的阴性阳性表达和CD105-MVD的高低表达（以均值34.26为界，分为低表达组L-CD105MVD（≤34.26)和高表达组H-CD105MVD（>34.26)）分别进行Kaplan-Meier生存分析，并对胶质瘤患者随访资料进行单因素Logrank检验，发现EphA2阳性表达患者的生存率明显低于阴性表达者(x2=9.487,P=0.002)、MVD高表达组患者的生存率明显低于低表达组(x2=31,725, P=0.007)；而ephrinA1阳性表达患者的生存率却明显高于阴性表达组(x2=32.842,P=0.019)。多因素Cox风险模型生存分析显示计分检验（score）p=0.0009，似然比检验（Change From Previous Block）p=0.0001，两种检验方法显示COX模型整体检验有统计学意义。风险因素分析显示EphA2、MVD和ephrinA1都是风险因子，EphA2（1.981）和MVD(0.965)的回归参数均为正值,说明其表达越高,生存期越短；ephrinA1的回归参数为负值(-1.114)，说明其表达越高,生存期越长。EphA2阳性表达、MVD值增高、ephrinA1阴性表达均提示胶质瘤死亡的风险增加，其中EphA2的相对危险度最高为5.861（P=0.012），说明EphA2阳性表达的病人死亡的风险为阴性表达病人的5.861倍，CD105-MVD的相对危险度次之为2.625（P=0.021），ephrinA1的相对危险度最小为0.328（P=0.028）。EphA2、MVD阳性、ephrinA1阴性的胶质瘤病人较三者均阳性或三者均阴性或EphA2、MVD阴性ephrinA1阳性的病人生存期明显缩短。表明EphA2、ephrinA1和MVD均是影响胶质瘤预后的因素,且均具有重要的预后意义。结论：1EphA2在恶性脑胶质瘤中特异性高表达、ephrinA1特异性低表达与胶质瘤的侵袭性和不良预后密切相关，且EphA2过表达和ephrinAl的缺陷表达可能协同促进胶质瘤组织新生血管的生成，在胶质瘤的发病及恶性进展中发挥重要作用。2EphA2、MVD和ephrinA1均是重要的恶性脑胶质瘤预后相关风险因子，EphA2阳性表达、MVD值增高、ephrinA1阴性表达均提示胶质瘤死亡的风险增加，均具有重要的预后意义。同时检测EphA2、MVD和ephrinAl的表达对于评估患者预后和指导术后放、化疗方案的选择可能具有重要的意义，EphA2/ephrinA1有望成为脑胶质瘤诊断和特异靶向治疗的新靶点。