研究背景及目的MICA/B是固有免疫系统的组成部分,在包括肝癌在内的多种肿瘤中高表达,通过与其受体NKG2D相互作用,发挥肿瘤免疫作用。脱氧氮杂胞苷5-aza-dC是一种甲基化酶抑制剂,我们以往的实验发现5-aza-dC可诱导肿瘤细胞MICB的表达,并增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。最新研究表明RNAi机制也与固有免疫系统相关,Dicer是RNAi系统中的关键酶,在秀丽隐杆线虫中Dicer的缺失,可引起固有免疫基因表达的改变。为了研究MICA与肝癌的关系,本课题将首先以HepG2细胞为研究对象,观察MICA在L02细胞和HepG2细胞中的表达差异,并进一步研究Dcier缺失及5-aza-dC对HepG2细胞MICA的诱导作用及可能机制。最后我们还将从临床角度出发,观察MICA、Dicer在HCC患者中的表达是否异常并初步探讨其意义和机制。方法1.为了沉默Dicer,使用Dicer siRNA转染HepG2细胞;为了阻断ATM,使用ATM特异性抑制剂咖啡因处理HepG2细胞或ATM siRNA转染HepG2细胞。2. Realtime RT-PCR检测Dicer、ATM、MICA mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白水平。3.免疫荧光染色法检测γ-H2AX水平。4.收集经病理证实的36例HCC患者的肝癌、邻近非癌组织标本及患者临床资料（年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤转移、肿瘤个数、肿瘤分期）,Realtime RT-PCR检测肝癌及癌旁组织MICA、Dicer mRNA表达水平。结果1.流式细胞术结果显示HepG2细胞高水平表达MICA,而正常肝细胞L02几乎不表达MICA。2. 5-aza-dC处理或选择性沉默Dicer可上调HepG2细胞MICA的表达（P <0.05）,并引起DNA损伤特异性指标γ-H2AX增高。3. 5-aza-dC或选择性沉默Dicer上调HepG2细胞MICA作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因或ATM特异的siRNA所阻断（P <0.05）。4.Realtime PCR结果显示MICA mRNA在肝癌标本及邻近非癌标本中表达水平无显著差异（P >0.05）。而Dicer mRNA在肝癌标本中的表达低于邻近非癌标本,差异有显著性（P<0.05）。5. Spearman’s rank-order coefficients统计分析表明肝癌标本中MICA、Dicer mRNA水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤转移、肿瘤个数、肿瘤分期等临床参数无显著相关性（P >0.05）。结论1. 5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达,其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。2.Dicer在肝癌中低表达,提示RNAi系统可能与肝癌的发生发展相关。Dicer的缺失可能继发性启动ATM依赖的DNA损伤途径并激活内源性免疫系统。