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目的:对7-O-香叶基槲皮素体外诱导两种人肺癌细胞A549和NCI-H1975发生凋亡与自噬的作用进行研究。方法:(1)在7-O-香叶基槲皮素诱导肺癌细胞发生凋亡作用的研究中,应用MTT法测定不同浓度(0、15、25和35 μM)的7-0-香叶基槲皮素在不同的作用时间(12、24和48 h)下对肺癌细胞A549和NCI-H1975细胞活力的影响;采用DAPI染色、AO/EB双荧光染色和透射电镜方法从形态学方面观察凋亡现象;用周期测定法检测7-O-香叶基槲皮素对两种肺癌细胞周期分布的影响;用AV-PI双染法检测不同浓度下7-O-香叶基槲皮素对细胞凋亡的影响;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、pro-caspase 3和cleaved-PARP等的表达。此外,运用caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK验证7-O-香叶基槲皮素所诱导的凋亡是否具有caspase依赖性;采用Real-time PCR方法研究7-O-香叶基槲皮素对肺癌细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。(2)在7-O-香叶基槲皮素诱导肺癌细胞发生自噬作用的研究中,运用透射电镜观察自噬标志物自噬小体;Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclinl、ATG5和p62等的表达。(3)在7-O-香叶基槲皮素诱导的凋亡与自噬的关系研究中,分别运用自噬抑制剂氯喹和Beclinl siRNA来抑制自噬,进而考察自噬对凋亡的影响。此外,用流式细胞仪检测7-O-香叶基槲皮素对两种肺癌细胞中活性氧(ROS)产生量的影响,应用ROS特异性抑制剂NAC来考察ROS在7-O-香叶基槲皮素诱导的凋亡与自噬中的作用。结果:(1)在7-O-香叶基槲皮素诱导肺癌细胞发生凋亡作用的研究中,MTT结果显示,7-0-香叶基槲皮素能够以剂量和时间依赖性的方式抑制两种肺癌细胞的细胞活力,且作用明显强于槲皮素;其对肺癌细胞A549和NCI-H1975的细胞毒性明显强于对正常肺成纤维样细胞HLF。形态学结果表明,7-0-香叶基槲皮素作用组的肺癌细胞发生皱缩,细胞核发生变化,细胞数减少,凋亡数目明显增多。周期测定结果显示,7-O-香叶基槲皮素能够明显将两种肺癌细胞周期阻滞于G0/G1期。AV-PI双染法结果显示,7-0-香叶基槲皮素呈现剂量依赖性地促进细胞凋亡。Western blotting检测结果显示,凋亡相关蛋白Bax和cleaved-PARP表达明显上调,pro-caspase3和Bcl-2表达明显下调,且这些蛋白的表达具有剂量依赖性。凋亡机制结果显示,7-O-香叶基槲皮素所诱导的凋亡具有caspase依赖性;Real-time PCR结果表明,7-0-香叶基槲皮素作用组的hTERT的mRNA表达水平明显降低。(2)在7-O-香叶基槲皮素诱导肺癌细胞发生自噬作用的研究中,透射电镜结果显示,7-0-香叶基槲皮素作用组能够明显观察到自噬体的存在;Western blotting检测结果显示,自噬相关蛋白LC3-II和Beclinl的表达随浓度的增加明显上调,p62的表达明显下调,而ATG5的表达几乎不变。(3)在7-O-香叶基槲皮素诱导的凋亡与自噬的关系研究中,运用自噬抑制剂CQ和Beclinl siRNA后,7-0-香叶基槲皮素诱导的凋亡现象明显减弱,说明自噬可能对凋亡具有促进作用;相关机制的初步研究结果显示,7-0-香叶基槲皮素能促进肺癌细胞中ROS的释放,且使用ROS抑制剂NAC后,7-O-香叶基槲皮素所诱导的自噬和凋亡现象明显被抑制。结论:本研究表明,7-0-香叶基槲皮素具有良好的体外抗肺癌作用,这种作用主要表现在诱导两种肺癌细胞A549和NCI-H1975发生凋亡和对凋亡具有促进作用的自噬,且这种作用可能与过量ROS产生有关。7-O-香叶基槲皮素有望发展成为一种新的抗肺癌药物,具有很大的研究和开发价值。