利用等离子体诱变技术选育多杀菌素高产菌株

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多杀菌素为刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)发酵产生的次级代谢产物,是一种新型生物杀虫剂,因其安全、高效的特点,已在多个国家广泛使用。本研究首先对实验室保藏的多杀菌素生产菌株B进行自然分离纯化,得到遗传稳定的菌株B7,其多杀菌素产量为195.43μg/m L(40 m L/250 m L发酵瓶),选定该菌作为本研究诱变育种的原始出发菌株。本研究分别采用浅蓝菌素、丙酸钠、磷酸二氢钾、2-脱氧-D-葡萄糖作为筛选剂,定向筛选不同抗性的突变株,以提高育种效率。通过筛选剂耐受性实验,确定浅蓝菌素筛选浓度为30μg/m L,丙酸钠筛选浓度为4 mg/m L,磷酸二氢钾筛选浓度为30mg/m L,2-脱氧-D-葡萄糖筛选浓度为32 mg/m L。以菌株B7为原始出发菌株,进行了四轮常压室温等离子体(ARTP)诱变,诱变工作气体为99.99%高纯氦气(He)。根据各剂量致死率及正突变率关系确定等离子体诱变最佳剂量区间为50-70 s,筛选效率最高的抗性压力为丙酸钠。经四轮诱变筛选得到遗传稳定的菌株4-50-6,其多杀菌素产量为375.85μg/m L(40 m L/250 m L发酵瓶),较原始出发菌株的产量增加了92.32%。利用以99.99%高纯氮气(N2)为工作气体的多功能等离子体诱变系统(MPMS)对菌株4-50-6进行等离子体、紫外线复合诱变,等离子体诱变剂量为10-40 s,紫外线照射剂量为30 s,以丙酸钠为筛选剂获得遗传稳定的菌株5-35-19,其多杀菌素产量为441.86μg/m L(40 m L/250 m L发酵瓶),较原始出发菌株产量增加了126.10%。诱变选育过程中对突变株菌落形态及产量关系进行了研究,确定了菌落形态与多杀菌素产量具有一定的相关性。根据其对应关系进行正突变株的筛选,从而提高了筛选效率。
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