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本实验建立了以依诺沙星作为内标,环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星在鲫鱼肌肉组织中的毛细管电泳多残留检测方法。通过研究缓冲溶液的类型、pH值、有机溶剂添加剂、进样量等电泳条件,得到最佳的缓冲溶液是含10%(v/v)乙腈的pH 5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液,以35 mbar的压力进样8 s。组织样品经过C<,18>固相萃取柱浓缩和净化处理,用二极管阵列检测器进行检测(275 nm)。结果,四种药物在20~400 μg/kg范围内线性关系良好,R<2>在0.999 0至0.999 7之间。在40、100和200μg/kg三个添加浓度,测得环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星和二氟沙星的平均回收率分别为65.4%~84.0%、74.2%~86.7%、67.1%~98.2%和66.4%~92.2%。四种药物的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为20μg/kg和40μg/kg。方法日内变异系数介于3.0%~13.5%之间,日间变异系数在6.7%~14.4%之间。该毛细管电泳残留检测方法快速、简单、经济,符合残留检测要求,适用于大批量阳性样本的筛选。
将该检测方法应用于恩诺沙星在鲫鱼肌肉组织中残留消除的研究。以鲫鱼为研究对象,在20℃水温条件下,以5 mg/kg体重的剂量灌服给药,连续给药5 d后采样,每个采样时间点采4条鲫鱼,使用毛细管电泳进行检测。研究结果,恩诺沙星在肌肉组织中的消除曲线方程为:Y=5877e<-0.0144t>(μg/kg),消除半衰期(t<,1/2>)为48.1h,恩诺沙星(加环丙沙星)最高残留限量为100μg/kg,在鲫鱼中的休药期(置信区间为95%)为976度日。本实验研究结果表明,本方法适于药物在动物体内的残留消除的研究。