莲子心脂溶性成分分析及甾醇酯的提取和纯化的研究

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莲子心中含有丰富的甾醇酯,甾醇酯具有降低血清胆固醇,预防心脑血管疾病等生理功效。本课题主要对莲子心中的甾醇酯进行了分析、提取和纯化,并制备出天然的高纯度甾醇酯产品。通过薄层色谱、气相色谱等方法分析了莲子心的脂溶性成分;采用溶剂提取法对莲子心甾醇酯进行提取,并通过柱层析法对甾醇酯进行了纯化,最后对纯化的甾醇酯产品进行了性质和组成分析。本课题建立一种薄层色谱和GC-MS/FID结合的方法,分析了湖南、江西和福建三种莲子心的毛油中的总甾醇、游离甾醇和甾醇酯的组成和含量。结果表明:莲子心的毛油含量为13.63%~14.04%,毛油中的的总甾醇含量为10.93~12.76 g/100g,游离甾醇0.86~1.06 g/100g,甾醇酯17.86~20.04 g/100g。谷甾醇(45.16%~54.67%)和△5-燕麦甾烯醇(25.74%~33.10%)是甾醇酯中的主要甾醇,亚油酸(63.56%~65.87%)、油酸(8.32%~10.35%)和山嵛酸(9.04%~9.92%)是甾醇酯中的主要脂肪酸。莲子心毛油主要成分为甘油三酯,其次是甾醇酯、游离甾醇、甘油二酯、甘油一酯、游离脂肪酸、磷脂、叶绿素和类胡萝卜素等。通过溶剂提取法对莲子心甾醇酯进行提取。考察正己烷、乙醚、乙醇、甲醇、乙酸乙酯和丙酮等溶剂对甾醇酯的提取效果,最终选择丙酮为提取溶剂;在单因素实验的基础上,采用响应面法优化的丙酮提取甾醇酯的工艺条件为:温度45℃,时间12min,料液比1:12 g/mL,提取次数3次,在此条件下甾醇酯的提取率达到85.09±1.04%。该工艺操作简便,时间短,温度低,耗能少,提取率高,而且使用单一溶剂便于回收利用,该工艺为工业化生产甾醇酯提供一定的参考。通过柱层析法对莲子心甾醇酯进行纯化。莲子心甾醇酯粗产品(丙酮提取物)中含有甘油酯、脂肪酸、叶绿素等成分,本实验采用柱层析法解决了甾醇酯与这些杂质成分难以分离的问题。通过单因素实验考察吸附剂种类、洗脱剂、上样量、洗脱速率以及填充柱高度与直径比值(H/D),以甾醇酯纯度和回收率为指标,得到的最佳工艺条件为:吸附剂为硅胶(200~300目),洗脱剂为石油醚:乙醚:乙酸(v/v/v=90:10:1),上样量2.0 g,洗脱速率为1.0 mL/min,H/D值12:1(填充柱高36 cm,硅胶用量约为80 g),在此条件下甾醇酯的纯度为95.56±1.32%,回收率为95.70±3.05%。该纯化工艺实现了精制甾醇酯产品的过程,而且制备的甾醇酯的纯度和回收率都很高,外观为淡黄色油状液体,是一种天然的甾醇酯。
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