白菜病害生防多功能工程菌株的构建

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qczjhyt
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为了选育对多种白菜病害具有拮抗作用的菌株用于生物防治,本试验以革兰氏阳性菌芽孢杆菌KR和革兰氏阴性菌假单胞菌B13为亲本进行原生质体融合,主要结果如下:在以0.6 mol/L蔗糖为稳定剂,pH 8.0,溶菌酶8 mg/mL,37℃,酶解80 min的条件下,KR原生质体得率可达31.6%;在以.0.6 mol/LNaCl为稳定剂,pH 7.0,溶菌酶6 mg/mL,37℃,酶解45 min,B13原生质体可达95.2%。为了提高再生率,KR酶解20 min,采用夹层培养,再生培养基中以0.6 mol/L蔗糖做稳定剂,Ca2+ 0.03mol/L,Mg2+ 0.02 mol/L,琥珀酸钠0.3 mol/L,L-色氨酸0.2 g/L,培养基在37℃下放置72 h原生质体再生率可达42.7%;B13酶解15 min,采用夹层培养,培养基中以0.6 mol/L NaCl做稳定剂,Ca2+ 0.02 mol/L,Mg2+ 0.01 mol/L,琥珀酸钠0.3 mol/L,L-色氨酸0.1 g/L,培养基在37℃下放置48 h原生质体再生率可达15.3%。2.0单位/mL的硫酸妥布霉素和5×10-3 g/mL的氯霉素可分别抑制B13和KR,培养基中添加这两种抗生素可选出融合子。本试验共得到182个融合子,连续传10代后,得到一株能稳定遗传的融合子KB1。KB1长2.99381μm,宽0.45195μm,杆状,周生鞭毛,有芽孢,革兰氏染色阴性。KB1在A培养基中,经35℃,pH 6.5,60 h发酵的滤液,用平板打孔法,置于平板的孔内,其对软腐菌产生了1.70 cm的抑菌圈。在PDA中添加经35℃,pH 8,60 h发酵的KB1的A培养基滤液10%,黑斑病菌饼生长8 d后大小仅为1.61 cm,明显小于对照。
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