单-ADP-核糖基转移酶3基因对人乳腺癌增殖、凋亡及侵袭的影响

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第一部分单-ADP-核糖基转移酶3基因过表达对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响目的:探讨人单-ADP-核糖基转移酶3(ART3,mono-ADP-ribosyltransferase3)基因对乳腺癌细胞(MDA-MB-231)增殖、凋亡、侵袭的影响。方法:将人ART3基因重组真核质粒pCMV-ART3-myc-tag转染入人乳腺癌细胞MDA-MB-231,以G418进行稳定转染细胞株筛选。采用Western blot法检测稳定转染细胞中ART3蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:ART3基因在MDA-MB-231细胞中稳定过表达。ART3转染组细胞增殖和侵袭能力均高于未转染组(P<0.05);同时ART3过表达组细胞凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)。结论:本实验成功构建ART3基因稳定过表达人乳腺癌MDA-MB-231细胞模型,且ART3基因能促进乳腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,为进一步研究该基因在乳腺癌发生发展中的作用奠定了实验基础。第二部分单-ADP-核糖基转移酶3基因对人乳腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响目的:探讨单-ADP-核糖基转移酶3基因对MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法:用过表达ART3基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞与未转染的MDA-MB-231细胞构建裸鼠移植瘤模型,成瘤后每3天对肿瘤体积进行测量,并根据数据绘制肿瘤生长曲线。成瘤30天后处死裸鼠,提取肿瘤组织中蛋白作western blot检测ART3表达情况。结果:裸鼠移植瘤模型构建成功,根据裸鼠移植瘤生长曲线,过表达ART3组移植瘤生长速度快与未转染ART3组,肿瘤组织蛋白western blot结果显示过表达ART3移植瘤中ART3表达显著强于未转染组。结论:成功构建的裸鼠移植瘤模型中,ART3基因能促进MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长,为进一步研究ART3在体内对乳腺癌发生发展及其机制奠定了基础。
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