海洋胶原蛋白/羟基磷灰石复合骨修复材料的制备及其性能研究

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骨损伤对人类的影响日益严重,由于车辆的普遍、建筑工业的发展、老年人数的剧增,促使骨损伤严重影响到人们的生活质量。天然骨的主要成分就是羟基磷灰石与胶原蛋白。海洋胶原蛋白拥有很多良好的特性。如,易溶于酸性及碱性溶液、低免疫原性和热稳定性好等特点。羟基磷灰石作为人工骨材料具有天然的优势,可以满足植入体的生物活性和生物相容性。本研究就是以胶原蛋白与羟基磷灰石为主要原料,制备了复合骨修复材料并研究其可行性。1.对冷冻鲨鱼皮进行羟脯氨酸的测定从而计算出胶原蛋白的含量。鲨鱼皮中胶原蛋白质量百分比约为9.21%。其中,酶溶性胶原蛋白的提取率高于酸溶性胶原蛋白。利用SDS-PAGE电泳得到鲨鱼皮胶原蛋白最大肽链相对分子质量约110KDa,两条相对分子量较小的约为80Kda和75KDa。利用DSC测定了胶原蛋白的热变性温度,两种方法得到的胶原蛋白有相同的变性温度,在32℃左右。2.通过Box-Behnken(?)心组合试验设计及响应面分析对在鲨鱼皮提取胶原蛋白的条件优化,得出了胶原蛋白提取率的二次方程模型。通过方差分析,确定了各因素对提取率的影响是显著的,该模型具有统计学意义。并得到优化工艺条件为:胃蛋白酶含量1.05%、醋酸浓度1.12M、提取时间43.95h,胶原蛋白的理论得率9.39%。随后进行了试验验证,基本符合。从而得到,响应面分析法确定胶原蛋白提取最优工艺是可行的。3.利用单因素试验确定静电纺丝的较优纺丝条件。得到的条件为:胶原蛋白含量10%、施加电压12kV、注射速率1.Oml/h。为了寻找更为精确的最优条件借助正交试验设计法,进行L9(34)正交试验。按照设计试验操作,得到各组试验条件下的试验结果纺丝电镜图。其中以最优纺丝效果为10.0,观察不同条件下的纺丝效果给出相应的数值。这里对各试验组的纺丝效果有很大的主观性,这也是本实验的一个不足之处。通过计算分析,得到不同因素对纺丝效果的影响程度为:胶原蛋白含量>施加电压>注射速率。最优纺丝条件为:胶原蛋白含量11%、施加电压11kV和注射速率1.1ml/h。4以胶原蛋白纳米纤维为支架,羟基磷灰石大量的沉积附着并形成化学键,形成较为稳定而且具有一定特性的复合材料。通过对复合材料进行了扫描电镜、红外光谱检测、X衍射检测、力学性能及细胞相容性的检测。结果表明:制备的纳米材料纤维直径粗细均匀、具有良好的力学性能和细胞相容性。通过对该材料的初步研究,可以确定其在骨创面修复方面有很大的前景。
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