铅干预下凝结芽孢杆菌R11对蛋鸡的益生作用

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本研究选用一株具有铅耐受性的凝结芽孢杆菌R11作为研究对象,探究铅干预下凝结芽孢杆菌R11作为益生菌添加剂添加在蛋鸡饲粮中对蛋鸡的益生作用。通过本研究,可以从基因表达调控及代谢活动水平了解铅对凝结芽孢杆菌益生功能的影响,同时为今后在蛋鸡饲料受铅污染的情况下,对凝结芽孢杆菌的使用提供理论指导。首先观察铅干预下凝结芽孢杆菌R11对蛋鸡益生作用的表观现象,利用凝结芽孢杆菌R11冻干菌粉开展蛋鸡铅攻毒饲养试验。选取90只产蛋性能及体重相近的罗曼粉蛋鸡(28周龄),随机分为6个处理组,每个处理组3个重复,每个重复5只蛋鸡。采用2×3双因素试验设计,设定饲粮中铅添加量分别为0 mg/kg(基础日粮组)、10 mg/kg(低铅组)及100 mg/kg(高铅组),同时各组分别再设定凝结芽孢杆菌R11冻干菌粉试验组,使饲料中有效活菌数达3×107cfu/g,未添加菌粉组则以等质量脱脂奶粉作对照。预饲期1周,正饲期4周。然后为深入探究铅干预下凝结芽孢杆菌R11基因表达调控及代谢产物的变化,试验设计如下:铅干预水平设置0、1、5、10、100 mg/kg,同时设置空白培养基为阴性对照组,每组6个重复;同一批次接种凝结芽孢杆菌R11后于42℃培养24 h后,每组(除阴性对照组外)随机挑选3个重复进行转录组学分析,每组(包括阴性对照组)6个重复进行代谢组学分析。最后根据转录组学及代谢组学数据整合的结果,筛选相关基因并分析饲养试验中各试验组蛋鸡盲肠内容物中相关基因的表达量变化,并结合表观现象,以阐明铅干预下凝结芽孢杆菌R11对蛋鸡的益生作用。主要结果如下:(1)铅攻毒饲养试验结果显示,凝结芽孢杆菌R11具有增强抗氧化能力及肠道健康等作用。主要表现为总抗氧化能力、总超氧化物歧化酶活力显著增高,甘油三酯含量、十二指肠及盲肠内沙门氏菌的绝对丰度及盲肠内总细菌的绝对丰度显著降低。无铅干预下,添加凝结芽孢杆菌R11后过氧化氢酶活力及丙二醛含量显著降低;低铅干预下,添加凝结芽孢杆菌R11后过氧化氢酶活力、空肠内大肠杆菌、沙门氏菌及绿脓杆菌和结肠内大肠杆菌的绝对丰度显著降低;高铅干预下,过氧化氢酶活力显著增高,而产蛋率、丙二醛含量、盲肠与结肠内大肠杆菌的绝对丰度显著降低。(2)转录组学结果显示,铅干预下凝结芽孢杆菌R11对氨基酸的代谢及脂肪酸的合成受到抑制,同时苯丙氨酸合成能力、抗氧化应激能力及次生代谢产物生物合成能力增强。代谢组学结果显示,凝结芽孢杆菌R11主要合成物质为苯基乳酸、4-乙酰氨基丁酸及十二烷酸,主要利用物质为N-庚酰基-高丝氨酸内酯。在铅干预下对黄酮类化合物的合成通路被激活,对十二烷酸及4-乙酰氨基丁酸合成减少,对苯基乳酸合成增多,同时对N-庚酰基-高丝氨酸内酯的利用程度略微减弱。(3)相对定量结果显示,在蛋鸡盲肠内与4-乙酰氨基丁酸及十二烷酸合成相关的基因arg G、spe B、acc A和fab G分别在低铅组及高铅组中下调;与苯基乳酸、芹菜素及大豆苷元合成相关的基因yhd R、aro C、his C和phe A分别在低铅组及高铅组中均显著上调,同时在高铅组中上调倍数均高于低铅组。综上所述,凝结芽孢杆菌R11在蛋鸡肠道中通过分泌苯基乳酸、4-乙酰氨基丁酸及十二烷酸的同时减少N-庚酰基-高丝氨酸内脂来改善蛋鸡抗菌抗氧化能力;在铅干预条件下,凝结芽孢杆菌R11对黄酮类化合物芹菜素及大豆苷元的合成通路被激活,能增强蛋鸡抗菌抗氧化能力,但在高铅干预下(100 mg/kg Pb)黄酮类化合物合成过量可能是导致蛋鸡产蛋率下降的原因之一。
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