Waston和Crick提出DNA双螺旋结构后，人们逐步发现了DNA聚合酶，它是以一条链为模板通过DNA聚合酶聚合形成一条新的链。科学家后来又发现另一种酶能够在DNA复制时破坏互补碱基对中的氢键，从而使DNA双螺旋打开，这类酶被称为解旋酶，至今已有上百种解旋酶被发现。人们根据解旋酶的二维结构和一级序列,把解旋酶分为几大家族来分类研究。经过多年的研究发现解旋酶具有多种功能,在细胞内它们参与DNA复制、修复、转录重组以及RNA接拼、核糖体组装、蛋白质翻译,端粒稳定等。最近,还发现个别解旋酶甚至参与机体天然免疫反应机制。解旋酶已不仅仅只是分开核酸双链结构的一类酶,它的生物功能远不止此。解旋酶第二大家族中的RecQ解旋酶亚家族在核酸代谢过程中起了关键的作用。在哺乳动物中包含有5个成员:RecqQL1,WRN,BLM,RecQL4和RecQL5,其中WRN,BLM和RecQL4的突变可分别导致3种常染色隐形遗传病:布卢姆综合征,沃纳综合征和Rothmund Thomson Syndrome。特别是RecQL4作为RecQ家族一员由于它在临床上的发现它具有双重作用，即不但其功能缺失促进肿瘤高发，而且其异常的高表达也可促进人类肿瘤的进展过程。有研究发现异常高水平的RecQL4蛋白与前列腺肿瘤细胞的致瘤性密切相关。因此做为抗肿瘤药物研发及新的肿瘤治疗战略RecQL4具有重要的临床应用价值。基于此本研究希望利用生物信息学的方法分析RecQL4抗原表位和研制特异性配对单克隆抗体，并初步开展相关检测产品的研发。为进一步开展研究RecQL4表达水平与肿瘤细胞相关性，以及肿瘤对铂类或其它种类化疗药物敏感性研究奠定基础。本项目分别采用生物信息学的方法获得RecQL4的多肽抗原，通过软件预测确定5条抗原表位多肽的氨基酸序列，并进行人工合成。合成的多肽抗原通过质谱鉴定和高效液相纯化，纯度达到抗原合成的要求。并把合成多肽与载体蛋白KLH偶联，形成免疫抗原。用该5个抗原免疫Balb/c小鼠，每条多肽抗原分别获得了一株稳定分泌单克隆抗体杂交瘤细胞株，编号分别为1B5、2D6、3C8、4D2、5A7。5株单克隆抗体细胞培养上清抗体Westernblot显示2D6和5A72个抗体与Recql4基因工程表达抗原特异性结合。2株单克隆抗体纯化后的抗体效价分别为1:1.24×105、1:1.24×105，亲和力常数分别为K(2D6)=2.1×109L/moL，K(5A7)=6.7×108L/moL。利用2D6和5A7这2株抗体进行胶体金双抗体夹心检测方法初步探讨，在胶体金检测方法初步建立的过程中，我们对反应体系中的各个环节进行了优化。确定了包被胶体金为2D6，标记浓度为4.8ug/ml，5A7为划膜抗体，划膜浓度为0.6mg/ml。在0.25ng/ml-8ng/ml的检测范围内，线性方程y=1.0356x+0.0039，R2=0.9924。