桔梗总多糖对猪圆环病毒2型感染的致炎调节作用

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zumei2003
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猪圆环病毒2型(PCV2)因高检出率和高度传染性已经成为了养猪场不容忽视的病原体,PCV2除了引起断奶仔猪多系统衰竭综合征之外,还会造成PCV2相关性肺炎和肠炎等。在养猪场现有的条件和养殖模式下,PCV2引起的猪罹患猪圆环病毒病(PCVAD)后,多表现为免疫抑制,生长发育不良,多系统炎症等特征,给养猪场带来严重的经济损失。因此,研究缓解PCV2引起的过度炎症反应的相关药物是必要且迫切的。中兽药安全高效,其在“未病先防、既病防变”方面优势突出。多糖是中药中主要的活性物质,具有显著的免疫调节、抗炎、抗凋亡、抗氧化等作用,是“扶正固本”、增强免疫功能的物质基础。前期研究发现,桔梗多糖(PGPSt)具有增强非特异性免疫和细胞免疫作用,可提高机体抗病力。但关于PGPSt对PCV2感染引起过度炎症反应的影响,目前尚不明确。因此,本研究致力于研究能缓解PCV2感染引起炎症反应的抗炎药物。拟选取3D4/21细胞和昆明小鼠作为研究对象,利用PCV2感染3D4/21细胞和小鼠建立的体内外炎症反应模型,研究PGPSt的体内外抗炎作用。为了明确PGPSt对细胞活性的影响,用不同浓度PGPSt处理3D4/21细胞和PCV2感染的3D4/21细胞36 h,发现PGPSt对3D4/21细胞无毒性并且保护感染的细胞免受炎性损伤。为了进一步探究PGPSt对PCV2感染3D4/21细胞引起炎性反应的调节作用,ELISA和q PCR检测炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平,Western Blot检测组蛋白H3和组蛋白H4乙酰化水平及i NOS和COX-2蛋白表达,并进一步检测PGPSt对NF-κB和MAPKs信号通路的影响。结果发现,与PCV2组相比较,200μg/m L PGPSt能够显著抑制细胞内组蛋白H3和组蛋白H4的高度乙酰化,下调组蛋白乙酰转移酶(HAT)和上调组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的活性,抑制i NOS和COX-2蛋白水平的表达,降低促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平,增加抗炎因子IL-10的水平,抑制p65,p38和Erk1/2的磷酸化水平。结果表明,200μg/m L PGPSt可通过抑制炎症因子和抑制促炎性酶的表达、抑制NF-κB和MAPKs信号通路的激活发挥PGPSt的体外抗炎作用。为进一步研究PGPSt抗炎保护效果,构建PCV2感染小鼠所致的炎症反应模型。实验设立对照组、PCV2感染组和PGPSt干预组。通过ELISA方法检测小鼠血清中炎性因子水平,Western Blot检测脾脏组织中促炎性蛋白的表达。结果发现,PGPSt显著抑制IL-6、IL-1β和TNF-α的分泌,促进IL-10的表达,抑制PCV2诱导的i NOS和COX-2的表达。结果表明,PGPSt在PCV2感染小鼠所致的炎症反应模型中发挥了明显的抗炎作用。综上所述,PGPSt对PCV2感染引起的体内外炎症反应具有抗炎作用,为深入研究PGPSt抗炎机制,提供了基础参考依据,为中药有效成分研究、开发及应用,提供了理论数据支持。
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