【摘 要】
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目的:探讨通过慢病毒干扰细胞分化抑制因子1基因表达,对BMP-2增加兔椎间盘软骨终板细胞软骨特异性基因Ⅱ型胶原、aggrecan表达的影响。方法:兔椎间盘软骨终板组织从新西兰大
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目的:探讨通过慢病毒干扰细胞分化抑制因子1基因表达,对BMP-2增加兔椎间盘软骨终板细胞软骨特异性基因Ⅱ型胶原、aggrecan表达的影响。方法:兔椎间盘软骨终板组织从新西兰大白兔获取,分离并培养软骨终板细胞,使用第2代软骨终板细胞进行实验。使用绿色荧光蛋白慢病毒(GFP LV)、高表达Id1基因慢病毒(Id1+LV)及RNA干扰Id1基因慢病毒分别转染二代软骨终板细胞,通过荧光显微镜了解慢病毒转染情况,RT-PCR及Western blot法检测慢病毒转染兔软骨终板情况,不同慢病毒转染对兔软骨终板细胞Id1 mRNA表达和Id1蛋白合成的影响。RNAi Id1、高表达Id1慢病毒分别和BMP-2慢病毒共同转染软骨终板细胞,并设置BMP-2慢病毒转染组、空载慢病毒转染组对照,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)、ELISA法观察软骨终板内Id1表达上调或下降,Id1蛋白合成差异对BMP-2上调椎间盘终板软骨终板细胞合成Ⅱ型胶原和aggrecan的作用。结果:(1)慢病毒转染兔软骨终板后与原代对比,细胞形态无明显改变,高表达Id1 LV和RNAi Id1 LV能有效转染兔软骨终板细胞,并干扰内源性Id1基因的表达。(2)BMP-2 LV和高表达Id1 LV共同转染兔软骨终板细胞后,COL II、aggrecan mRNA表达和蛋白合成均显著高于BMP-2 LV、高表达Id1LV单独转染,比较差别有统计学意义(P<0.05)。(3)终板细胞内Id1基因表达下调后,软骨终板细胞合成Ⅱ型胶原蛋白与aggrecan明显下调(P<0.05)。结论:Id1基因表达上调能够增加BMP-2促软骨终板细胞合成II型胶原和ACAN的作用。
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