论文部分内容阅读
在睾丸组织中，内皮素-1是由支持细胞分泌，通过旁分泌作用 刺激间质细胞睾酮的合成。这一作用的机理尚不明了。本文分两部分 探讨了ET-1在Leydig细胞中的信号传导途径及其对睾酮合成关键蛋 白基因表达的调节作用，揭示其促睾酮合成的作用机制。 方法：第一部分以不同浓度ET-1(0.1～100ng/ml)和hcg(1～ 100ng/ml)刺激分离纯化的大鼠睾丸间质细胞，随后在ET-1刺激各组 中加入hCG(1ug/ml)、PKC抑制剂GF109203X(1uM)、PKA时制剂H89 (10nM)，人钙通道阻滞剂硝苯地平(100uM)以及钙离子(3mM)，收集 培养液测定睾酮含量。第二部分提取ET-1刺激各组间质细胞的总 RNA，用RNA印迹杂交和半定量RT-PCR方法测叫定StAR和P450scc mRNA 表达水平。 结果．1)ET-1在 0.01～10ng/ml剂量范围内对Legdig细胞的 刺激作用呈剂量依赖性，睾酮合成踉础值增高约3倍；2)ET-1和 hCG有显著的叠加效应；3)GF 109203X完全阻断了0.01～1ug/ml的 ET-1对睾酮的刺激作用，但是对较大剂量的ET-1(10ng/ml)只达到 部分阻断效应；4)H89、硝苯地平以及细胞外钙浓度对ET-1促睾酮 合成作用没有影响；5)在ET-1作用下，StAR和P450scc mRNA表达 分别增加了55.6%和 51.5%。 结论：1)ET-1对大鼠Leydig细胞的睾酮产生呈现剂量依赖的 刺激效应，并与hCG有显著的协同作用；2)这种作用主要是通过 PLC/PKC信号途径实现的，PKA和电压门控钙通道并未参与这一过程； 3)ET－1增加 StAR和 P450SCC mRNA表达水平，加速了睾酮合成的限 速步骤。