脑胶质瘤中细胞凋亡及相关基因Fas、bcl-2和survivin表达的研究

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目的:肿瘤的生长有赖于细胞分裂、分化和细胞死亡。细胞凋亡在肿瘤发生、发展及治疗中的作用已成为当今肿瘤学研究领域的热点。肿瘤中的细胞凋亡现象很可能是机体对抗肿瘤的主动努力[1-3]。肿瘤细胞凋亡的产生受多种基因的网络式调控,其中包括一系列相关的诱导基因(如:Fas)和抑制基因(如:bcl-2,survivin)。脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤之一,其发病机理尚未完全阐明。许多学者对脑胶质瘤的细胞凋亡进行了大量的研究,但对于细胞凋亡与胶质瘤发生、发展的关系尚未取得一致性结论。本文通过检测胶质瘤中细胞凋亡、增殖活性及其凋亡调控基因Fas/APO-1、bcl-2和survivin的表达,进一步探讨肿瘤细胞凋亡在胶质瘤发生、发展及其恶性转化过程中所起的作用。试图找到更多与肿瘤发生、发展和预后相关的因素,从而探索出新的抗胶质瘤模式。材料与方法:选取2000-2001年间在河北医科大学第二医院行手术治疗的50例脑胶质瘤患者,其中男性24例,女性26例;年龄8-72岁,其中<30岁者13例,30-60岁者29例,>60岁者8例;病程1周-6个月。所有患者术前均未行化疗、放射治疗和免疫治疗。手术行肉眼全切27例,次全切除20例,部分切除3例。所有标本用4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋后存档。每例标本做5μm厚连续切片备用,并做HE染色确定诊断。按WHO(1999)标准进行分级和分类,其中I级11例(毛细胞性星形细胞瘤9例、脉络丛乳头状瘤2例),II级16例(纤维性星形细胞瘤10例、原浆性星形细胞瘤3例、少枝胶质细胞瘤2例、室管膜瘤1例),III级14例(间变性星形细胞瘤12例、室管膜瘤2例),IV级9例(多形性胶质母细胞瘤6例、室管膜母细胞瘤2例、<WP=4>髓母细胞瘤1例)。另取5例因创伤行内减压的正常脑组织作为对照。所有患者术后随访一年,回访45例,回访率90%,其中死亡17例(37.8%),存活28例(62.2%)。术后放疗20例(44.4%),术后化疗30例(55.6%)。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;免疫组织化学染色法(SABC)检测Fas、Bcl-2 、Survivin和PCNA的表达。凋亡细胞和PCNA阳性的细胞核呈棕黄色着色。在400倍显微镜下进行观察,每个标本组织片随机观察5个视野,分别计算每一病例的阳性染色的肿瘤细胞与所测肿瘤细胞的比例,作为凋亡指数(AI)和增殖指数(PI)。Fas、Bcl-2和Survivin阳性的肿瘤细胞浆呈棕黄色着色,表达结果根据文献描述的方法进行半定量法分析。阳性肿瘤细胞的百分比通过400倍高倍镜下至少5个视野确定,并按以下5个范围计分:0,<1%;1,1%-25%;2,26%-50%;3,51%-75%;4,>75%。肿瘤细胞免疫染色的强度按如下计分:1,浅黄色;2,中等黄色;3,深黄色。因为肿瘤染色不均一,按主要形式进行评分。阳性肿瘤细胞的百分比和染色强度相乘产生每个病例的加权分数。加权分数= 0被定为阴性,其余病例被定为阳性。本文所有统计分析用SPSS 10.0软件包进行。凋亡指数和增殖指数用均数±标准差表示。采用χ2检验、t检验、方差分析、Pearson相关和多因素Logistic回归分析。检验标准采用P < 0.05。结果:胶质瘤中无论分化程度高低均可见标记的凋亡细胞(阳性率为100%)。50例胶质瘤的凋亡指数(AI)范围是0.1%~2.3%,平均0.940±0.541%,中位数为0.900%。AI与胶质瘤分级有关,即胶质瘤的恶性程度越高,凋亡指数越高。50例胶质瘤的PCNA表达阳性率为100%,增殖指数(PI)范围是1~40%,平均16.98±10.85%,中位数为15.00%。PI和AI之间呈明显正线性相关。PI与胶质瘤分级有关,即胶质瘤的恶性程度越高,增殖指数越高。而AI/PI则随着胶质瘤级别增高而减小。本组50例脑胶质瘤中35例有不同程度的Fas表达,阳性率为70%(35/50)。不同病理分级的脑胶质瘤中Fas的表达率有显著差异,即随着胶质<WP=5>瘤恶性度增高,Fas的表达率上升。脑胶质瘤中Bcl-2表达的总阳性率为58%(29/50)。Bcl-2的表达率在高、低级别的脑胶质瘤中的差异有显著性意义,即随着胶质瘤恶性度增高,Bcl-2的表达率上升。脑胶质瘤中Survivin表达的总阳性率为56%(28/50)。Survivin的表达率在高、低级别的脑胶质瘤中的差异有显著性意义,即随着胶质瘤恶性度增高,Survivin的表达率上升。Fas阳性与Fas阴性组的AI分别为1.071±0.544%和0.633±0.405%,两者差异有显著意义。Fas的加权计分和AI之间呈明显线性正相关。Bcl-2阳性与Bcl-2阴性组的AI分别为0.883±0.541%和1.019±0.545%,两者差异无显著意义。Bcl-2阳性的加权计分和AI之间呈负线性相关。Survivin阳性与Survivin阴性组的AI分别为0.800±0.484%和1.118±0.569%,两者差异有显著意义。Survivin阳性的加权计分和AI之间呈明显负线性相关。低AI (<0.94)患者的术后1年生存率是76% (19/25),而高AI(>0.94)患者是45%(9/20),提示AI有预后指导意义。死亡组与存活组的AI分别为1.000±0.367%和0.861±0.602%,两者差异无显著意义。而两组的AI/PI分别为0.0460±0.0144和0.0768±0.0200,有显著差异。Fas阳性胶质瘤患者的术后1年生存率(71%; 22/31)高于Fas阴性胶质瘤患者(42.9%; 6/14),二者有显著差异。Bcl-2阳性胶质瘤患者的
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